RPS4Y1对HUVECs生物学功能的调控及其在子痫前期发病中的机制研究

作     者：李海营 

作者单位：重庆医科大学 

学位级别：硕士

导师姓名：漆洪波

授予年度：2018年

学科分类：1002[医学-临床医学] 100211[医学-妇产科学] 10[医学] 

主      题：RPS4Y1 HUVECs JAK2/STAT3信号通路 子痫前期 

摘      要：目的:子痫前期(preeclampsia,PE)是妊娠期间特有的且累及多系统的疾病,其发生于孕20周后,主要表现为新发的蛋白尿与高血压,据报道其发病率约为3-5%,对孕产妇及围产儿的生命安全造成极大的威胁。目前关于子痫前期的确切发病机制尚不明确,但已有研究表明,PE的发生与滋养细胞侵袭不足导致的胎盘缺血、氧化应激学说、血管内皮受损学说、炎症学说及母胎界面免疫失衡学说等有密不可分的关系。课题组前期通过cDNA表达谱芯片技术筛选发现核糖体蛋白S4,Y连锁1基因(Ribosomal protein S4 Y-linked 1,RPS4Y1)在子痫前期胎盘组织中mRNA的表达较正常妊娠晚期胎盘组织显著升高。RPS4Y1基因编码的蛋白是进化保守的核糖体蛋白S4E家族的一个成员,为构成细胞核糖体40s小亚基的蛋白之一,该基因功能异常在特纳综合征患者中扮演了重要作用。已有研究证实RPS4Y1蛋白表达在血管内皮细胞及滋养层细胞,并且主要定位于细胞质。而RPS4Y1在PE中的功能国内外尚无相关研究。我们课题组的研究目的:(1)检测早孕期绒毛、蜕膜组织、正常妊娠晚期胎盘和PE胎盘中RPS4Y1的定位和表达情况;(2)在人脐静脉内皮细胞株(HUVECs)中探究RPS4Y1的表达及其对该细胞的生物学功能的影响;(3)缺氧/复氧(H/R)处理HUVEC细胞,模拟子痫前期胎盘组织中的氧化应激损伤,结合JAK2特异性抑制剂AG490,探究RPS4Y1基因在JAK2/STAT3信号通路中对血管内皮细胞生物学功能的调控和在PE发病中的可能相关分子机制,为子痫前期的病因机制及诊断提供理论依据和新思路。方法:(1)免疫组织化学法检测RPS4Y1蛋白在早孕期绒毛、蜕膜组织、正常妊娠晚期胎盘及PE患者胎盘组织中的表达和定位。(2)实时荧光定量PCR和Western blot研究正常妊娠晚期胎盘和重度PE患者胎盘组织中RPS4Y1蛋白的表达。(3)通过慢病毒转染,沉默HUVEC细胞中的RPS4Y1基因表达。(4)实时荧光定量PCR和Western blot检测干扰效率。(5)分别用细胞迁移实验、管腔成型实验、CCK-8法、流式细胞分析法检测干扰RPS4Y1表达对HUVECs的迁移、血管成型、增殖及凋亡的影响。(6)体外缺氧/复氧模型的建立,模拟PE氧化应激损伤,检测H/R损伤对HUVEC细胞的生物学功能的影响及对RPS4Y1表达的调控。(7)采用JAK2特异性抑制剂AG490,观察JAK2/STAT3信号通路在H/R条件下对HUVEC细胞的生物学功能的调控及其与RPS4Y1的关系,进一步明确RPS4Y1基因调控内皮细胞功能在PE发病中的作用及可能机制。结果:1.免疫组织化学结果显示,RPS4Y1在早孕期的绒毛、蜕膜组织、正常妊娠晚期胎盘组织及PE胎盘组织中均表达,且主要定位于血管内皮细胞及滋养细胞;2.在正常足月胎盘和子痫前期胎盘中均检测到RPS4Y1 mRNA的相对表达,相比正常对照组(0.89±0.05),PE组RPS4Y1 mRNA的相对表达量(1.54±0.04)显著上升(P0.05)。*** blot蛋白定量结果显示,相对于正常妊娠晚期胎盘组织中RPS4Y1的蛋白量,PE胎盘组织中的RPS4Y1蛋白量显著上升,分析结果显示有统计学意义(P0.05)。4.下调RPS4Y1的表达,可以促进HUVEC细胞的迁移和血管成型能力,而对细胞增殖和凋亡无明显影响。5.H/R处理可以导致HUVEC细胞的生物学功能下降,并且可增加HUVEC细胞中的RPS4Y1蛋白的表达。同时,H/R处理可抑制HUVEC细胞中的JAK2/STAT3细胞通路的激活。***490对JAK2/STAT3信号通路有明显抑制效果,但对RPS4Y1的表达无明显印象,而下调RPS4Y1表达后,JAK2/STAT3磷酸化增强。结论:***4Y1在孕早期,主要定位于血管内皮细胞及滋养层细胞。2.较正常妊娠晚期胎盘组,RPS4Y1在子痫前期胎盘组织中表达明显升高。***4Y1表达升高可抑制HUVEC细胞的血管成型和细胞迁移功能。***4Y1可能是JAK2/STAT3信号同路的上游分子,受H/R的影响表达增加,通过抑制该信号通路的激活,调控HUVEC细胞的生物学功能,参与PE的发生发展过程。