氙气对3日龄新生大鼠脑白质损伤脑组织CLIC4 mRNA、Bcl-2蛋白表达的影响

作     者：赵吉秀 

作者单位：青岛大学 

学位级别：硕士

导师姓名：姜红

授予年度：2017年

学科分类：1002[医学-临床医学] 100204[医学-神经病学] 10[医学] 

主      题：氙气 CLIC4 LPS Bcl-2 缺氧缺血 

摘      要：目的腹腔内注射脂多糖联合缺氧缺血制作3日龄新生大鼠脑白质损伤模型,并对脑白质损伤新生大鼠给予氙气干预。通过检测其脑组织中CLIC4 m RNA、Bcl-2蛋白的表达,探讨氙气对新生大鼠脑白质损伤的神经保护作用机制。方法将3日龄SD新生大鼠120只随机分为空白对照组(n=24),脑损伤组(n=24)和氙气干预组(n=72)。空白对照组腹腔注射生理盐水(0.05mg/kg),仅游离右侧颈总动脉不做低氧处理;脑损伤组腹腔注射脂多糖(lipopolysaccharide,LPS,0.05mg/kg),游离并结扎右侧颈总动脉并进行低氧处理,但不进行氙气处理;氙气干预组腹腔注射LPS(0.05mg/kg),游离并结扎右侧颈总动脉并进行低氧处理及氙气吸入处理(50%氙气+30%氧气+20%氮气的充满20L恒温密闭箱,0.5L/min缓慢维持,持续处理3小时)。根据脑损伤后氙气延迟干预的时间(0小时、2小时和5小时),将氙气干预组分为C1、C2、C3三个亚组(n=24)。各组大鼠分别于0h、24h、48h、72h各取6只行多聚甲醛灌注后断头取脑组织,进行脑组织病理检测、蛋白质印迹法(Western Blot,WB)检测B淋巴细胞瘤-2(B-cell lymphoma-2,Bcl-2)蛋白含量、逆转录-聚合酶链反应(reverse transcriotion-polymerase chain reaction,RT-PCR)检测氯离子通道蛋白4(Chloride Intracellular Channel 4,CLIC4)m RNA的表达。采用独立样本t检验、单因素方差分析和Bonferroni法进行统计学分析。结果(1)实验新生鼠行为学监测:腹腔注射脂多糖及缺氧缺血处理后,脑损伤组和氙气干预组的新生鼠出现肢体抖动、烦躁、紫绀、呼吸急促等行为学异常;在氙气处理之后,C1组新生鼠的症状在约2小时后消失;而脑损伤组、C2组和C3组的症状约在5小时后消失;空白对照组新生鼠未出现明显异常反应。(2)HE染色观察脑组织病理变化:脑损伤组新生鼠可见脑白质苍白,结构疏松,细胞肿胀,核膜不清楚,细胞核固缩,可检测到细胞变性和坏死,神经纤维无序,胶质细胞数量增加;氙气干预组脑白质染色淡染,结构相对较完整,较少细胞变性坏死,各亚组之间无明显差异;而空白对照组脑组织结构正常,染色清晰,细胞排列整齐。(3)WB检测Bcl-2蛋白含量:在相同时间点,各组Bcl-2蛋白的表达量相比较,差异有统计学意义(P0.05);与C1组相比,C2组和C3组Bcl-2蛋白表达在48h和72h显著降低,差异有统计学意义(P0.05)。(4)RT-PCR检测CLIC4 m RNA含量:与空白对照组相比较,在各时间点脑损伤组中新生鼠脑室周围白质CLIC4 m RNA的表达水平增加,差异有统计学意义(P0.05);与脑损伤组相比较,氙气干预各亚组中CLIC4 m RNA表达均明显减少,差异有统计学意义(P0.05)。结论(1)腹腔内注射LPS联合缺氧缺血可成功制作新生儿大鼠脑白质损伤模型;(2)氙气吸入干预可减轻新生儿大鼠脑白质损伤,减少细胞坏死;(3)新生大鼠脑白质损伤后Bcl-2蛋白表达水平升高,氙气可使其表达可下降,表明氙气可能通过抑制神经元凋亡进而减轻白质损伤作用;(4)氙气干预可下调CLIC4基因的表达,表明氙气可能通过抑制CLIC4基因的表达作用于Bcl-2蛋白相关途径抑制神经元凋亡而发挥神经保护作用;(5)氙气治疗脑白质损伤的时间窗至少有5小时,且越早干预效果越好。