肝细胞生长因子基因修饰的骨髓间充质干细胞条件培养基对急性肺损伤大鼠的作用研究

作     者：罗思静 

作者单位：福建医科大学 

学位级别：硕士

导师姓名：林群

授予年度：2017年

学科分类：1002[医学-临床医学] 10[医学] 

主      题：骨髓间充质干细胞条件培养基 肝细胞生长因子 脂多糖 肺损伤 

摘      要：目的观察HGF-MSC-CM及MSC-CM对LPS诱发急性肺损伤大鼠的影响。方法经气管内雾化吸入LPS 5mg/kg诱导急性肺损伤大鼠模型。将117只健康雄性SD大鼠随机分为三组(n=39):HGF-MSC-CM组(H组)、MSC-CM组(M组)、对照组(LPS组)。雾化吸入LPS后8 h,H组经尾静脉输注HGF-MSC-CM0.3 ml,M组经尾静脉注入MSC-CM 0.3 ml,LPS组经尾静脉注入等量浓缩的DMEM作为对照。分别在给予LPS后1天、3天、7天经麻醉后处死大鼠,留取标本。每个时间点有13只大鼠,其中5只大鼠用于检测肺组织伊文思蓝含量;其余8只大鼠在上述时间点过量麻醉后处死,留取组织及血液标本。检测肺组织W/D。比色法测定肺MPO活性。通过HE染色法观察肺组织病理形态学改变,并进行肺损伤评分。采用ELISA法测定血清TNF-α、IL-6、IL-10的含量。采用免疫组化法测定肺PCNA的表达情况。采用western blot法测定p-c-met的表达水平。结果肺组织病理学显示,LPS组可见大量炎症细胞浸润、片状出血、肺组织水肿、肺泡间隔断裂、肺泡萎陷。M组可见少量炎症渗出物,肺泡结构较为清晰。H组未见明显炎性渗出物,肺组织结构正常。在给予LPS后第1天、第3天,与LPS组相比,M组、H组肺损伤评分减低(p均0.05)。在给予LPS后第7天,与LPS组相比,H组肺损伤评分降低(p0.05)。在给予LPS后第3天、第7天,与M组相比,H组肺损伤评分降低(p均0.05)。在给予LPS后第1天、第3天、第7天,M组、H组肺W/D、肺MPO活性明显低于LPS组(p均0.05);H组肺W/D、肺MPO活性低于M组(p均0.05)。在给予LPS后第1天、第3天、第7天,与LPS组相比,H组、M组血清TNF-α水平降低(p均0.05)。在给予LPS后第1天、第3天,H组血清TNF-α水平低于M组(p0.05);M组、H组血清IL-6水平低于LPS组(p0.05);H组血清IL-6水平较M组降低(p0.05)。给予LPS后第1天,H组血清IL-10浓度高于M组和LPS组(p均0.05)。在给予LPS后第3天,M组、H组血清IL-10浓度高于LPS组(p均0.05);H组血清IL-10浓度高于M组(p均0.05)。在给予LPS后第7天,H组血清IL-10浓度高于LPS组、M组(p均0.05)。给予LPS后第1天,H组伊文思蓝渗漏低于LPS组、M组(p0.05)。在给予LPS后第3天,与LPS组相比,M组、H组伊文思蓝渗漏减轻(p均0.05);H组伊文思蓝渗漏低于M组(p0.05)。在给予LPS后第7天,H组伊文思蓝渗漏低于LPS组(p0.05)。PCNA免疫组化显示,在三个时间点,与LPS组相比,M组、H组肺PCNA阳性表达率上升(p均0.05);H组肺PCNA阳性表达率高于M组(p均0.05)。在给予LPS后第7天,与LPS组相比,H组、M组肺p-c-met蛋白水平表达水平升高(p均0.05);H组肺p-c-met蛋白表达水平高于M组(p0.05)。结论脂多糖诱导急性肺损伤大鼠模型构建成功。肝细胞生长因子基因修饰的骨髓间充质干细胞条件培养基和骨髓间充质干细胞条件培养基可以显著减轻肺损伤。其中肝细胞生长因子基因修饰的骨髓间充质干细胞条件培养基可以发挥更强的治疗作用。