肿瘤微环境酸化通过ASICs促进MDSCs免疫抑制功能及其机制的研究

作     者：伊萍 

作者单位：中南民族大学 

学位级别：硕士

导师姓名：杨光忠

授予年度：2016年

学科分类：1002[医学-临床医学] 100214[医学-肿瘤学] 10[医学] 

主      题：髓系来源细胞 酸敏感离子通道 ROS p-p38 p-p65 p-STAT1 pSTAT6 

摘      要：髓源抑制细胞(myeloid-derived suppressors cells,MDSCs)是诱导肿瘤酸化微环境免疫抑制状态的重要细胞,往往导致肿瘤免疫治疗的失败。酸敏感离子通道(ASICs)是由H激活的门控阳离子通道,可以感知细胞内外H梯度的变化。本课题以小鼠来源的MDSCs为研究对象,探讨肿瘤酸化微环境促进MDSCs活化是否与其表达ASICs有关,以及ASICs对MDSCs的功能影响机制,主要研究内容和结果如下:1.肿瘤微环境酸化对MDSCs功能的影响肿瘤微环境酸化可促进MDSCs分泌抑制性的细胞因子。当pH降低至5.5较正常来源对照,酸化环境明显促进MDSCs表达ROS,COX-2,TNF-?,ARG-1。预先用阿米洛利处理可以明显抑制酸化环境刺激MDSCs因子分泌,预先用ASIC1抑制剂PcTx1能够抑制荷瘤小鼠MDSCs TNF-α表达,ASIC3抑制剂APET×2明显降低COX-2分泌,且两者均能减少ROS和ARG-1的产生。进一步研究发现预先加入PcTx1或APET×2均能够逆转MDSCs对T细胞增殖的抑制作用,使T细胞增殖显著增加恢复到正常增殖水平。上述结果提示ASIC1和ASIC3在酸化环境刺激MDSCs活化过程中起到重要作用。2.肿瘤微环境酸化对MDSCs功能影响的分子机制2.1微环境酸化时荷瘤小鼠来源MDSCs p38磷酸化水平明显增高,且预先加入阿米洛利后,p38磷酸化水平显著降低,酸化环境能够刺激MDSCs NF-кB途径的p65活化,分别用阿米洛利、PcTx1、APET×2预处理,发现PcTx1能够抑制p-p65,p-IкB,pIKK磷酸化,即抑制NF-кB信号通路活化,而APET×2对该信号通路作用不明显,提示MDSCs在酸化环境中NF-кB途径被激活,且其激活过程与ASIC1密切相关。2.2微环境酸化时,荷瘤小鼠MDSCs STAT1,STAT6磷酸化水平增高,预先加入阿米洛利、PcTx1、APET×2,发现pSTAT1,pSTAT6磷酸化水平显著下降,提示酸化条件可能通过刺激ASIC1,ASIC3,促发转录因子STAT1,STAT6磷酸化活化,进而介导MDSCs活化发挥免疫抑制作用。结论:(1)肿瘤酸化微环境促进MDSCs分泌ROS,COX2,TNF-α细胞因子,且PcTx1能够抑制荷瘤小鼠MDSCs TNF-α表达,APET×2明显降低COX2分泌,且两者均能减少ROS和ARG-1的产生。同时,PcTx1,APET×2能够逆转MDSCs对T细胞增殖的抑制作用。(2)在酸化环境中NF-кB途径被激活,且其激活过程与ASIC1密切相关。同时,酸化条件可能通过刺激ASIC1,ASIC3,促发转录因子STAT1,STAT6磷酸化活化,进而介导MDSCs活化发挥免疫抑制作用。