二甲基甲酰胺对心肌细胞毒性及其氧化应激机制研究

作     者：向梅 

作者单位：安徽医科大学 

学位级别：硕士

导师姓名：杨永坚

授予年度：2013年

学科分类：100405[医学-卫生毒理学] 1004[医学-公共卫生与预防医学(可授医学、理学学位)] 10[医学] 

主      题：DMF 心肌细胞 细胞毒性 细胞凋亡 氧化应激 

摘      要：目的探讨二甲基甲酰胺(DMF)对小鼠心肌细胞(H9c2)的细胞毒性和氧化应激在其细胞毒性中的作用及VitC的保护效应。 方法采用CCK-8法检测不同剂量梯度（0mM，50mM，100mM，150mM，200mM，250mM，300mM）DMF作用心肌细胞24h、48h、72h后的细胞毒性，并用AnnexinV-FITC/PI流式细胞术检测细胞凋亡率，用ROS、T-AOC、MDA、SOD、GSH试剂盒检测DMF作用后细胞的氧化应激状态。同时DMF（100mM）作用24h、48h、72h后，用0.025mM、0.05mM、0.10mM、0.25mM的VitC处理，以观察VitC的保护效应。 结果不同浓度的DMF分别作用于心肌细胞24h、48h和72h，产生了明显的细胞毒性,并呈现显著的剂量-时间效应关系。用DMF对心肌细胞进行染毒后细胞发生了脂质过氧化,并呈现一定的剂量-时间效应关系。用CCK-8法检测DMF作用于心肌细胞的24hIC50是250mM，48hIC50是220mM，72hIC50是200mM。在氧化应激指标的测量中，与溶剂对照组相比,DMF染毒24h（100mM，140mM，180mM，220mM，250mM）组,48h（100mM，140mM，180mM，200mM，220mM）组和72h（100mM，125mM，140mM，180mM，200mM）组ROS升高（P0.05），DMF染毒48h（220mM）组和72h（140mM、180mM）组分别与24h组相应浓度相比ROS升高（P0.05），DMF染毒72h（140mM、200mM）组与48h组相应浓度相比ROS升高（P0.05）;与溶剂对照组相比, DMF染毒24h（220mM、250mM）组,48h（180mM、200mM、220mM）组和72h（100mM、125mM、140mM、180mM、200mM）组T-AOC含量减少（P0.05），DMF染毒48h（220mM）组和72h（140mM、180mM、200mM）组分别与24h组相应浓度相比T-AOC含量减少（P0.05）， DMF染毒72h（140mM、180mM、200mM）组与48h组相应浓度相比T-AOC含量减少（P0.05）;与溶剂对照组相比, DMF染毒24h（180mM、220mM、250mM）组,48h（140mM、180mM、200mM、220mM）组和72h（100mM、125mM、140mM、180mM、200mM）组SOD含量降低（P0.05），DMF染毒48h（220mM）组和72h（100mM、140mM、180mM）组分别与24h组相应浓度相比SOD含量降低（P0.05），DMF染毒72h（140mM、180mM、200mM）组与48h组相应浓度相比SOD含量降低（P0.05）;与溶剂对照组相比, DMF染毒24h（180mM、220mM、250mM）组,48h（140mM、180mM、200mM、220mM）组和72h（100mM、125mM、140mM、180mM、200mM）组GSH含量下降（P0.05），DMF染毒48h（220mM）组和72h（140mM、180mM）组分别与24h组相应浓度相比GSH含量下降（P0.05），DMF染毒72h（140mM、180mM、200mM）组48h组相应浓度相比GSH含量下降（P0.05）;与溶剂对照组相比, DMF染毒24h（180mM、220mM、250mM）组,48h（140mM、180mM、200mM、220mM）组和72h（125mM、140mM、180mM、200mM）组MDA含量升高（P0.05），DMF染毒72h（140mM、200mM）组与24h组相应浓度相比MDA含量升高（P0.05），DMF染毒72h（140mM、200mM）组与48h组相应浓度相比MDA含量升高（P0.05）。保护组VitC在低浓度（0.025mM、0.05mM、0.10mM）时对DMF对心肌细胞的氧化损伤具有保护作用，使ROS降低，T-AOC含量增多， SOD含量升高，GSH含量升高，MDA含量减少，差异具有统计学意义(P0.05)。保护组VitC在高浓度（0.25mM）时反而加重DMF对心肌细胞的氧化损伤，差异具有统计学意义(P0.05)。通过DMF对心肌细胞的氧化应激检测指标（ROS、T-AOC、SOD、GSH、MDA）与浓度和时间的都具有相关性分析（P0.05）。可以说明，在相同作用时间时随着DMF浓度的增加心肌细胞的氧化应激加重，相同浓度时随着DMF作用时间的延长心肌细胞的氧化应激也加重。 结论二甲基甲酰胺(DMF)对小鼠心肌细胞细胞(H9c2)产生了明显的细胞毒性和氧化损伤,并呈现一定的剂