人足月胎盘羊膜细胞的生物学特性及其治疗肝纤维化的实验研究

作     者：陈宥艺 

作者单位：第四军医大学 

学位级别：硕士

导师姓名：杨瑛;吕双红

授予年度：2011年

学科分类：1002[医学-临床医学] 100201[医学-内科学(含：心血管病、血液病、呼吸系病、消化系病、内分泌与代谢病、肾病、风湿病、传染病)] 10[医学] 

主      题：羊膜上皮细胞 羊膜间充质干细胞 多能性 肝纤维化 移植 

摘      要：利用干细胞强大的增殖能力和分化能力来修复受损组织、重建组织结构、恢复脏器功能一直是干细胞研究关注点之一。近年来研究发现羊膜来源的细胞具有干细胞的特性,包括羊膜上皮细胞和羊膜间充质干细胞两类细胞,都表达一定量的与胚胎干细胞类似的多能性标志,在体外经诱导后具有多向分化能力,这使羊膜来源的细胞成为最有应用潜能的干细胞之一。此外,羊膜上皮细胞和羊膜间充质干细胞有其自身独特的优势,如较低的免疫原性和抗炎作用;属于产后废弃物,在获取上避免了胚胎干细胞研究的伦理学争执;来源丰富;在细胞的制备方面相对安全、简单。鉴于此,羊膜来源细胞的研究越来越受到重视,成为再生医学和组织工程研究中有价值的种子细胞。在本课题中,我们重点研究这两类细胞的多向分化能力,并通过动物实验探讨其在治疗肝纤维化方面的可行性。 目的: 研究羊膜上皮细胞和羊膜间充质细胞的多向分化能力,并探讨这两种细胞用于治疗肝纤维化疾病的可行性。 方法: 收集剖宫产足月胎盘的羊膜组织,通过多次胰酶消化法获取羊膜上皮细胞,再经胶原酶消化获取羊膜间充质干细胞,应用特定的诱导条件向脂肪细胞、成骨细胞、软骨细胞、肝细胞进行体外诱导分化,通过形态学观察,特殊染色等鉴定分化结果。再将分离培养的羊膜上皮细胞和羊膜间充质干细胞体内移植到四氯化碳损伤的肝纤维化动物模型体内,分别于移植后1周、2周通过血清学检测、病理学检测及B超影像学检测探讨羊膜上皮细胞和羊膜间充质干细胞在治疗肝纤维化疾病方面的可行性。 结果: 羊膜上皮细胞和羊膜间充质干细胞在体外经诱导后可以向脂肪细胞、成骨细胞、软骨细胞和肝细胞分化,羊膜上皮细胞向肝细胞诱导后具有一定的白蛋白分泌功能。羊膜上皮细胞和羊膜间充质干细胞在移植入四氯化碳造成的肝纤维化模型小鼠后,细胞能迁移至肝脏组织,并在一定程度上减轻了肝脏的纤维化。 结论: 羊膜上皮细胞和羊膜间充质干细胞具有多向分化潜能。通过移植这两类细胞能缓解肝纤维化程度,可能成为将来治疗肝纤维化的新途径。