重组人白细胞介素-2对大鼠慢性高眼压视神经损伤的保护作用及机制研究

作     者：王静 

作者单位：中南大学 

学位级别：硕士

导师姓名：段宣初

授予年度：2009年

学科分类：1002[医学-临床医学] 100212[医学-眼科学] 10[医学] 

主      题：rhIL-2 青光眼 视神经保护 信号通道 视网膜神经节细胞 

摘      要：目的:探讨大鼠玻璃体腔注射重组人白细胞介素2(recombinanthuman interleukin-2,rhIL-2)对Wistar大鼠慢性高眼压视网膜神经节细胞(retinal ganglion cells RGCs)损伤的保护作用及其是否通过巨噬细胞和信号传导途径起作用。 方法:采用532nm二极管激光烧灼Wistar大鼠3/4周角巩膜缘浅层静脉,阻断房水回流的方法建立大鼠慢性高眼压模型。(1)12只大鼠右眼建立模型,按建模成功后在不同时间分为1d,3d,1w,2w,4w,8w分别观察眼压变化情况,第8周处死摘除眼球行HE染色。(2)64只大鼠随机分为正常对照组、单纯高眼压模型组、溶剂(PBS)组和rhIL-2治疗组。正常对照组不作任何处理,其余组建立慢性高眼压模型,模型建立1周后,玻璃体腔内分别注射2μl PBS液或2μl rhIL-2,每组再分为3d,7d,14d,21d四个时间点,其中48只大鼠于处死前7天采用双上丘注射3%荧光金逆行标记,RGCs视网膜铺片行荧光照相,并输入计算机图像分析仪行视网膜神经节细胞计数;其中另外16只大鼠免疫荧光检测ED-1阳性巨噬细胞。(3)48只大鼠随机分为正常对照组、单纯高眼压模型组、rhIL-2治疗组和rhIL-2、LY294006、AG490混合液组,模型建立成功1周后,玻璃体腔内分别注射2μl PBS液,rhIL-2或信号转导阻断剂LY29400,AG490与rhIL-2混合液,大鼠Western blot检测用药后3h,12h,24h,96h不同时间PI3K/Akt、Jak/Stat3通路的激活情况;另外12只rhIL-2、LY294006、AG490混合液组大鼠分为3天,7d,14d,21d四个时间点,于处死前7天采用同样方法行视网膜神经节细胞计数。 结果:(1)激光烧灼法阻断大鼠角巩膜缘3/4周巩膜浅层静脉,慢性高眼压模型制作后大鼠右眼眼压较造模前明显升高(P0.01),正常对照组眼压在模型建立前后无明显变化(P0.05)。HE染色大鼠右眼视网膜神经节细胞计数与其正常对照组左眼比较,差异有显著统计学意义(P0.01)。(2)正常对照组,高眼压模型组及PBS组视网膜内均未见ED-1阳性巨噬细胞,rhIL-2治疗组视网膜内可见ED-1阳性巨噬细胞表达。(3)高眼压模型成功建立后模型组RGCs密度随着时间延长逐渐减少,各时间点计数有显著差异(P0.01)。rhIL-2治疗组在注药后3d,7d,14d,21d逆行标记的RGCs分别为182.23±7.16(个/4视野),186.74±8.78(个/4视野),188.53±12.99(个/4视野),190.54±10.39(个/4视野),均显著高于高眼压模型组(P0.01)。PBS溶剂组RGCs数与高眼压模型组相近无显著差异(P0.05)。rhIL-2、LY294006、AG490混合液组玻璃体腔注射后荧光金标记RGCs计数均显著低于单独rhIL-2玻璃体腔注射组(P0.01)。(4)rhIL-2组在玻璃体腔注射后不同时间,可见视网膜AKT,STAT3蛋白表达的变化,3h组可见AKT,STAT3蛋白少量表达与正常对照组无显著差异(P0.05),12h时AKT,STAT3蛋白表达水平增强,与正常对照组比较具有显著性差异(P0.01),24h以后下降,与正常对照组比较具有显著性差异(P0.01),96h仍有少量表达。 结论:(1)采用532nm激光烧灼大鼠角巩膜缘浅层静脉可成功地建立稳定的大鼠慢性高眼压模型。(2)玻璃体腔内注射rhIL-2能够抑制慢性高眼压RGC层神经元的凋亡,起到保护RGCs的作用。(3)玻璃体腔内注射rhIL-2可激活巨噬细胞,激活的巨噬细胞可以促进视神经损伤后视网膜神经节细胞的存活。(4)rhIL-2通过激活PI3K/Akt、JAK/STAT3信号转导通路使慢性高眼压模型视网膜RGCs存活增加而起到保护作用。