凉血活血复方对体外培养HaCaT、ECV304细胞的增殖、凋亡、及端粒酶活性的影响

作     者：李玉锋 

作者单位：大连医科大学 

学位级别：硕士

导师姓名：刘晓明

授予年度：2006年

学科分类：1008[医学-中药学(可授医学、理学学位)] 1006[医学-中西医结合] 100602[医学-中西医结合临床] 10[医学] 

主      题：凉血活血复方 银屑病 流式细胞术 细胞凋亡 端粒酶活性 

摘      要：目的:银屑病是一种常见的慢性炎性、增生性皮肤病,易反复发作,严重地影响患者的身心健康,是国内的外皮肤科领域重点研究和防治疾病之一。我国在应用中药治疗银屑病方面积累了丰富的经验。为了进一步开发临床治疗银屑病的有效的方剂并以科学的检测手段判定中药药效和探索中药治疗银屑病的可能的机制。本研究在先前临床研究的基础上,观察自拟银屑病方剂--凉血活血复方水醇粗提液对人用生化表皮细胞(HaCaT细胞株)、人脐静脉内皮细胞(ECV304细胞株)的增殖抑制效应、细胞凋亡诱导作用以及其对细胞株端粒酶活性的影响,探讨该复方治疗银屑病作用的有效浓度范围及其可能的作用机制,为该复方的临床应用及中成药的开发奠定科学的实验基础。 方法:银屑病的主要病理变化为表皮增殖过快和分化不全、真皮炎症浸润和乳头部微血管变化。本研究以体外培养的人永生化表皮细胞(HaCaT细胞株)及脐静脉内皮细胞(ECV304细胞株)分别模拟表皮角质细胞增殖过快及乳头部微血管变化之模型。将不同浓度的凉血活血复方水醇粗提液分别地作用于体外培养的HaCaT细胞株、ECV304细胞株,采用MTT法检测凉血活血复方水醇粗提液对细胞的增殖抑制作用以及药物的有效浓度范围及其IC50;采用倒置显微镜、投射电子显微镜观察细胞处理前后的细胞形态学改变;应用流式细胞术检测细胞周期的变化及凋亡比率;应用端粒重复序列扩增-酶联吸附(TRAP-ELAISA)试剂盒检测两株细胞的端粒酶活性变化。 结果:(1)凉血活血复方可以抑制HaCaT细胞株、ECV304细胞株的增殖,作用于HaCaT细胞株24小时其IC50为124.480 mg/ml,作用48小