非肽类Ang(1-7)受体激动剂AVE0991对大鼠糖尿病肾病的保护作用

作     者：陈志新 

作者单位：山东大学 

学位级别：硕士

导师姓名：关广聚;董波

授予年度：2016年

学科分类：1002[医学-临床医学] 100210[医学-外科学(含：普外、骨外、泌尿外、胸心外、神外、整形、烧伤、野战外)] 100201[医学-内科学(含：心血管病、血液病、呼吸系病、消化系病、内分泌与代谢病、肾病、风湿病、传染病)] 10[医学] 

主      题：糖尿病肾病 AVE0991 血管紧张素1-7 血管紧张素(1-7)受体激动剂 大鼠 

摘      要：研究背景与研究目的糖尿病肾病(diabetic nephropathy, DN)作为糖尿病所致的重要微血管并发症,DN发病率和死亡率不断增加,已成为人类健康的重要威胁。由于其发病机制复杂且尚未研究透彻,尚无针对性药物可以有效治疗糖尿病肾病。因此,探索新的治疗方法十分有必要。DN发病机制复杂,除代谢因素外,越来越多的临床和实验研究表明免疫炎症在糖尿病肾病在DN的发生发展过程中起重要作用。动物研究实验发现,DN肾组织巨噬细胞的聚集较正常肾组织明显增加,且巨噬细胞的聚集程度与肾功能的下降程度存在正相关关系。巨噬细胞活化后,分泌一系列的促炎症因子。这些巨噬细胞来源的因子可以促进细胞外基质如Collegen Ⅰ的产生,促进肾脏纤维化和DN进展。近年来,越来越多的研究表明在糖尿病肾组织中存在RAS系统过度活化是联系DN与炎症的一条重要纽带。其可能机制是在DN肾组织中血管紧张素II(AngⅡ)的产生增多伴血管紧张素1-7(Angl-7)生成减少。且已经大量研究表Ang1-7在可在多种疾病中发挥抗炎作用。AVE0991非肽类Ang1-7受体(又称Mas受体)激动剂,与Ang1-7作用位点相同,可模拟Ang1-7的诸多生物学效应,且半衰期长,较Ang1-7化学性质更为稳定。基于上述研究背景,本研究以链脲佐菌素(STZ)一次性腹腔内注射建立糖尿病大鼠模型,来探讨AVE0991对糖尿病肾病中巨噬细胞分泌的炎症因子及糖尿病肾病肾脏纤维化的影响。材料方法本文以30只Wistar大鼠平均随机分为3组：正常对照组(NC组)、糖尿病肾病组(DN组)、AVE0991处理组(AVE组)。DN组与AVE组腹腔注射链脲佐菌素(65mg/kg),STZ注射8周后,给予AVE组AVE0991灌胃处理,NC组及DN组取等量生理盐水灌胃,连续灌胃4周。12周末收集标本,检测各项生理生化指标;通过高碘酸-希夫(PAS)染色及免疫组化观察各组肾脏病理变化;实时荧光定量PCR及酶联免疫吸附实验(ELISA)法分别检测白介素1β(1L-1β)、白介素6(IL-6)和肿瘤坏死因子a(TNF-a)的mRNA及蛋白水平变化。Westernblot检测TGF-β表达量的变化。采用SPSS 16.0统计软件对数据进行统计分析。结果***组及AVE组较NC组相比体质量明显降低,血糖、肾质量体质量比、24小时尿蛋白定量、血肌酐明显升高;AVE组与DN组相比,AVE组大鼠24小时尿蛋白定量、血肌酐明显降低。体质量、血糖、肾质量体质量比则无明显降低。2.免疫组化比较不同组间纤维化指标Collegen I 、FN表达量及肾小球硬化指数,Collegen I、 FN表达量及肾小球硬化指数DN组及AVE组较NC组明显升高;AVE组与DN组相比,Collegen I、 FN表达量及肾小球硬化指数明显降低;3.实时定量PCR和ELISA分别检测IL-1β, IL-6, TNF-α结果示：DN组较NC组明显增多(P0.05),AVE0991组较DN组明显减少(P0.05)。4. Westernblot检测TGF-β示：DN组较NC组表达量明显升高(P0.05)。AVE组较DN组表达量明显降低(P0.05)。结论我们可以得出结论,AVE0991可以降低大鼠糖尿病肾病的纤维化及炎症水平对糖尿病肾病具有保护作用。