上皮性卵巢癌组织中TGFBI基因启动子甲基化及其与血管生成的关系

作     者：郭小芬 

作者单位：郑州大学 

学位级别：硕士

导师姓名：李红雨

授予年度：2012年

学科分类：1002[医学-临床医学] 100214[医学-肿瘤学] 10[医学] 

主      题：上皮性卵巢癌 DNA甲基化 TGFBI基因 血管生成 

摘      要：由于卵巢解剖部位较深,早期卵巢癌的症状不是很明显,且缺少早期诊断手段,多数卵巢癌发现时已是晚期。目前,卵巢恶性肿瘤死亡率居妇科恶性肿瘤的首位,上皮性卵巢癌约占90%,所以上皮性卵巢癌成为最受关注的妇科恶性肿瘤之一。 DNA甲基化的检测是目前探讨肿瘤发生机制的一个重要手段。在基因组中,CpG密集的区域被称作CpG岛,它多分布在5 和3 非编码区,CpG岛一般都是去甲基化状态,而启动子区CpG岛发生甲基化后,将直接或间接地抑制基因的转录,从而导致下游基因表达的沉默。经研究表明,启动子区甲基化可导致DNA稳定性、染色质结构、DNA构象及蛋白质与DNA间相互作用形成的变化,成为抑制基因表达的一种很重要机制。在肿瘤细胞中,抑癌基因CpG岛是高甲基化的,从而使临近的相关基因不能表达;相反,癌基因的CpG岛是低甲基化的,使其能够表达,但这两者都会促使肿瘤生长。所以,甲基化状态的显著改变是引起正常细胞恶变的重要原因之一 在人的腺癌细胞及其它细胞类型中,TGFBI被认为是转化生长因子β诱导的基因,它通过结合内皮细胞表面的特异性受体去调节肿瘤细胞的增殖并诱导血管生成。且研究表明：在肿瘤细胞系中,TGFBI基因表达沉默与其启动子区CpG岛的甲基化高度相关。细胞若缺失TGFBI会导致细胞过度增殖,且TGFBI表达的降低或缺失往往是导致肿瘤发生的重要因素。 血管内皮生长因子(VEGF)及其受体是目前所发现的最关键的促血管生长因子之一,它是肿瘤细胞自分泌的一个重要调节因子,它可调节肿瘤细胞的增殖、诱导新生血管的生成,并且与肿瘤自身的生长、浸润及远处转移有关。 本研究通过检测在正常卵巢组织、良性上皮性卵巢肿瘤组织及上皮性卵巢癌组织中TGFBI基因启动子的甲基化状态与VEGF蛋白的表达,并分析与血管生成的关系,旨在为上皮性卵巢癌的早期诊断及临床治疗提供一条新的思路和方向。 目的 探讨TGFBI基因启动子在上皮性卵巢癌组织中的甲基化状态及其与血管生成的关系。 材料与方法 1实验材料 选自郑州大学第三附属医院妇产科2008年8月-2011年3月的卵巢组织石蜡标本共70例,患者术前均未接受放疗和(或)化疗,所取组织标本已查阅病例资料并经病理学证实。患者年龄在18岁～70岁之间,其中正常卵巢组织20例(因子宫病变而行附件切除),良性上皮性卵巢肿瘤组织20例,上皮性卵巢癌组织30例。 2实验方法 在20例正常卵巢组织、20例良性上皮性卵巢肿瘤及30例上皮性卵巢癌石蜡组织中,分别采用甲基化特异性PCR法(MSP)和免疫组织化学SP法,检测TGFBI基因启动子的甲基化状态及VEGF的表达情况,并分析两者之间的关系,进而探讨与血管生成的关系。 3统计学处理 采用SPSS17.0软件包进行统计学分析,本文计数资料采用x2检验;相关性检验采用Spearman相关分析,检验水准α=0.05。 结果 ***法检测TGFBI基因甲基化状态良性上皮性卵巢肿瘤组织及上皮性卵巢癌组织中,TGFBI基因发生甲基化的比率分别为10.5%(2/19)、70%(21/30),经统计学分析(χ2=14.219P0.05),差异具有统计学意义。 2.免疫组织化学法检测VEGF表达在正常卵巢组织、良性上皮性卵巢肿瘤组织及上皮性卵巢癌组织中,VEGF阳性表达率分别为10%(2/20)、45%(9/20)、83.3%(25/30),经统计学分析(x2=26.298P0.05),差异具有统计学意义。 3.在上皮性卵巢癌组织中,TGFBI基因甲基化和VEGF表达的关联性经统计学分析示：TGFBI基因甲基化与VEGF表达具有相关性,且呈正相关。(rs=0.516P0.05)。 结论 1TGFBI基因启动子发生的甲基化可能参与了上皮性卵巢癌的发生。 ***基因启动子存在甲基化状态可能是VEGF蛋白表达的主要原因,该机制可能在上皮性卵巢癌的血管生成方面起着重要作用。