纤维连接蛋白对POAG小梁网细胞增殖、黏附、迁移及对整合素α5β1、α4β1表达的影响

作     者：胡艳 

作者单位：福建医科大学 

学位级别：硕士

导师姓名：吴瑜瑜

授予年度：2010年

学科分类：1002[医学-临床医学] 100212[医学-眼科学] 10[医学] 

主      题：POAG小梁网细胞 纤维连接蛋白 整合素α5β1 整合素α4β1 免疫细胞化学 

摘      要：目的探讨体外培养原发性开角型青光眼小梁网细胞的方法及其生物学特性,在此基础上研究纤维连接蛋白（fibronectin, FN）对POAG小梁网细胞增殖、黏附、迁移能力以及表达整合素α5β1和α4β1（integrinα5β1,α4β1）的影响。 方法采用原发性开角型青光眼患者小梁切除术中取得带小梁网的巩膜组织块进行体外培养。运用透射电镜,免疫细胞化学等方法对细胞进行鉴定,并观察其生物学特性。采用CCK-8法和Transwell小室法检测体外培养的传3代小梁网细胞经浓度为0μg/ml（对照组）,5μg/ml,10μg/ml,20μg/ml,40μg/ml,100μg/ml的FN处理24小时后,观察其细胞增殖、黏附、迁移能力以及表达整合素α5β1以及α4β1的表达量的变化。 结果1.组织块培养10天左右,可见细胞从其边缘向外生长。经鉴定为小梁网细胞,免疫细胞化学示纤维连接蛋白、层粘连蛋白、神经元烯醇化酶表达阳性。电镜透视可见细胞表面的微绒毛,胞浆的溶酶体、吞噬小泡等超微结构。 2.应用CCK-8法和Transwell法检测经浓度为5μg/ml,10μg/ml,20μg/ml,40μg/ml,100μg/ml的FN处理的实验组细胞吸光度的比值增殖分别0.45±0.016,0.52±0.015,0.65±0.011,0.78±0.012及1.15±0.014,各实验组与对照组0.37±0.018相比,P0.05,均有显著性差异,黏附分别为0.38±0.021,0.43±0.015,0.52±0.0210.78±0.025,0.85±0.014及1.19±0.019各实验组与对照组0.38±0.021相比,P0.05,均有显著性差异。迁移分别为0.59±0.005,0.62±0.006,0.68±0.002,0.78±0.003及0.89±0.001各实验组与对照组0.57±0.006（P0.05）,均有显著性差异。 3.免疫细胞化学染色法检测经浓度分别为5μg/ml,10μg/ml,20μg/ml,40μg/ml,100μg/ml的FN处理,实验组细胞整合素α5β1表达分别为0.242±0.015,0.254±0.018,0.261±0.005,0.267±0.014,0.365±0.019,与对照组0.239±0.011相比,P0.05均有显著差异。阳性面积比值分别为实验组0.1428±0.013,0.1946±0.018,0.2219±0.016,0.2679±0.011,0.17993±0.019,与对照组0.1252±0.012相比,P0.05均有显著差异。 整合素α4β1表达分别为0.232±0.005,0.245±0.003,0.263±0.005,0.276±0.004,与对照组0.231±0.001相比,P0.05均有显著差异。阳性面积比值分别为实验组0.1218±0.013,0.1346±0.016,0.1419±0.012,0.1679±0.011,0.1993±0.019,对照组0.1202±0.012,P0.05均有显著差异。 结论1.采用组织块培养法能成功体外培养原发性开角型青光眼人眼小梁网细胞,并鉴定其生物特性。 2.原发性开角型青光眼小梁网细胞表达整合素α5β1以及α4β1。 3.FN能促进体外培养原发性开角型青光眼小梁网细胞增殖、黏附、迁移能力,并在一定范围内呈现剂量依赖性。 4.FN能增加体外培养原发性开角型青光眼小梁网细胞整合素α5β1以及α4β1的表达,并在一定范围内呈现剂量依赖性。