siRNA干扰NBS1基因表达联合顺铂对三阴性乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖、凋亡和周期的影响

作     者：华晶 

作者单位：第二军医大学 

学位级别：硕士

导师姓名：王雅杰

授予年度：2015年

学科分类：1002[医学-临床医学] 100214[医学-肿瘤学] 10[医学] 

主      题：三阴性乳腺癌 NBS1 细胞增殖 细胞凋亡 顺铂 

摘      要：目的探讨siRNA敲低NBS1基因表达联合顺铂对三阴性乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖、凋亡和周期的影响。方法收集长海医院和瑞金医院2001年至2011年间收治的乳腺癌患者,共收集乳腺癌标本138例、正常癌旁乳腺组织97例,制作成组织芯片后,使用免疫组化方法明确NBS1蛋白在乳腺癌组织和癌旁正常组织中的表达情况。使用卡方检验比较乳腺癌组织组与癌旁组织组中NBS1蛋白阳性表达的比例。通过构建NBS1干扰质粒和阴性空载质粒,并通过腺病毒载体感染三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞,蛋白印迹法明确NBS1基因表达受抑制情况;CCK-8法检测干扰NBS1表达后顺铂对MDA-MB-231细胞体外增殖能力的影响;流式细胞法检测感染后实验组和阴性对照组MDA-MB-231细胞的凋亡和周期情况。结果免疫组化结果显示,乳腺癌组织组和癌旁正常组织组的NBS1表达的阳性率分别是80.43%和15.46%,乳腺癌组织中NBS1的阳性表达率明显高于癌旁组织,经卡方检验p0.05,两者阳性率差异有统计学意义。蛋白印迹法检测结果表明实验组NBS1蛋白表达水平明显低于阴性对照组和空白对照组(P0.05);CCK-8实验结果提示,同时在顺铂的作用下,与阴性对照组和空白对照组相比,实验组细胞增殖能力明显受到抑制(P0.05);流式细胞仪检测结果显示,实验组联合顺铂与阴性对照组联合顺铂相比凋亡率上升(P0.05);流式细胞仪测定周期结果显示实验组联合顺铂乳腺癌细胞出现G1期蓄积以及细胞进入M期和G2期发生阻滞。结论敲低NBS1基因的表达可以抑制三阴性乳腺癌细胞增殖,并促进癌细胞的凋亡。