PGRN在AD模型小鼠海马内的表达及与凋亡相关因子Bax/Bcl-2/Caspase-3关系的研究

作     者：程晓晖 

作者单位：广东药科大学 

学位级别：硕士

导师姓名：李国营

授予年度：2016年

学科分类：1002[医学-临床医学] 1001[医学-基础医学(可授医学、理学学位)] 100203[医学-老年医学] 10[医学] 

主      题：PGRN AD 海马 凋亡相关因子 

摘      要：背景:AD,也称老年痴呆症,是一种起病隐匿的进行性发展的神经退行性疾病,是老龄人口中发病率最高的疾病之一。临床表现为:认知和记忆功能障碍,日常生活能力减退,并有一些精神症状和行为改变。典型的病理特征为:神经原纤维缠结(NFT)、老年斑和颗粒空泡变性等。目前,AD发病机制尚不明确,多种因素可能参与致病,如遗传因素、免疫因素、神经递质和环境因素等。对于AD的发病机制众说纷纭,提出了各种学说,其中以“Aβ学说为主流学说。Aβ学说认为,由于代谢异常,Aβ蛋白不能被及时清除,使其在脑内特定区域内沉积,形成老年斑,最终导致神经元死亡,引起AD的发生。β淀粉样蛋白(Aβ),由39-43个氨基酸组成,是大脑皮质老年斑的的主要成分,它是由淀粉样蛋白前体(APP)经蛋白水解酶作用后的底物。其中,最为常见的是Aβ40和Aβ42片段。Aβ42更易聚集形成淀粉样蛋白,因此较之Aβ40具有更强的毒性作用。海马是人类大脑的重要组成部分,参与将短期记忆的信息加强转化为长期记忆和空间定位。在AD中,海马是首先受到损伤的区域,症状为记忆力衰退以及空间知觉的丧失。PGRN,颗粒蛋白前体,是一种分泌性糖蛋白,由染色体17q21编码,由593个氨基酸组成,在胚胎发育、组织修复、肿瘤发生和炎症应答等多种病生理过程中发挥重要作用。它与多种神经系统疾病相关,如额颞叶痴呆(FTD)、AD、多发性硬化症(MS)及缺血性脑血管病等。目的:探讨PGRN在AD模型小鼠海马内的表达及与Aβ之间的关系,并进一步证实是否涉及细胞损伤及凋亡相关机制。方法:1.通过将aβ1-42注入到c57bl/6小鼠双侧海马区来构造类似ad动物模型。实验小鼠分为:空白组、ns对照组、模型组(1d组、7d组、14d组)5组。2.常规he染色,观察不同组中海马区细胞的形态变化。3.利用免疫组织化学的方法检测不同组中aβ的沉积。4.利用elisa试剂盒检测不同组中aβ的含量。5.利用免疫组织化学和westernblot方法检测pgrn在各组小鼠海马内的表达。6.利用免疫组织化学和westernblot方法检测凋亡相关因子bax、caspase-3及bcl-2在各组小鼠海马内的表达。结果:1.he染色结果显示:与空白组相比,ns组对于海马内的细胞并无明显差异;而模型组主要引起了海马区齿状回细胞的改变,主要表现为细胞的核深染,核固缩,模型组中的1d组最为明显,随着时间的推移,7d组和14d组差异性减小。2.aβ免疫组化和elisa结果结果显示:空白组与ns对照组海马区没有aβ的沉积,模型组中,1d组的aβ表达最多,7d组次之,14d组最少,结果具有显著性差异(p0.001)。3.pgrn的免疫组化和westernblot结果表明:空白组中有少量pgrn的表达,ns对照组pgrn的表达明显增多;在模型组中,1d组的pgrn表达最多,随着时间的推移,7d组和14d组的pgrn表达逐渐减少,结果具有显著性差异(p0.001)。4.凋亡相关因子bax、caspase-3的免疫组织化学和westernblot结果显示:模型组中,1d组表达最多,随着时间的推移,7d组和14d组表达逐渐减少,结果具有显著性差异(p0.05)。5.凋亡相关因子bcl-2的免疫组织化学和westernblot结果显示:模型组中,1d组表达最少,随着时间的推移,7d组和14d组表达逐渐增多,结果具有显著性差异(p0.05)结论:1.pgrn的表达随着aβ含量的变化而变化,二者呈现正相关。2.促凋亡蛋白Bax、Caspase-3的表达与PGRN的表达呈现正相关性,而抑凋亡蛋白Bcl-2的表达与PGRN的表达呈现负相关性。3.PGRN可能参与了AD的病理过程,并可能与AD病理过程中存在的神经元凋亡机制有关,这为AD的研究提供了新的思路。