碳青霉烯类耐药肺炎克雷伯菌耐药基础及毒力因子分析

作     者：吕继芳 

作者单位：浙江大学 

学位级别：硕士

导师姓名：肖永红

授予年度：2016年

学科分类：1010[医学-医学技术（可授医学、理学学位）] 10[医学] 

主      题：肺炎克雷伯菌 耐药性 碳青霉烯酶 分子分型 毒力因子 

摘      要：研究背景及目的肺炎克雷伯菌是医院获得性感染的主要致病菌之一。不断增多的碳青霉烯类耐药肺炎克雷伯菌对感染治疗造成巨大的威胁。产碳青霉烯酶是肺炎克雷伯菌对碳青霉烯类耐药的主要原因。高毒性肺炎克雷伯菌近年来在各地区不断报道,但对碳青霉烯类耐药肺炎克雷伯菌的毒力因子特征知之甚少。本研究的主要目的是了解大学附属医院碳青霉烯类抗生素耐药肺炎克雷伯菌分子流行病学特征、碳青霉烯酶基因的携带情况及其毒力特征。研究方法收集浙江大学附属第一医院2014年1月到2014年12月临床标本中分离的碳青霉烯类耐药肺炎克雷伯菌,采用VITEK 2 Compact全自动微生物鉴定系统进行细菌鉴定及药敏检测,改良Hodge试验检测碳青霉烯酶表型,聚合酶链反应(PCR)检测碳青霉烯酶基因、多位点序列分型(MLST)和质粒复制子分型。高毒力(高粘)菌株鉴定采用黏液丝实验。PCR检测毒力因子基因。研究结果共收集138株碳青霉烯耐药肺炎克雷伯菌,细菌对多种临床常用抗菌药物均显著耐药。改良Hodge试验127株结果阳性(92.0%)。PCR结果显示125株携带碳青霉烯酶基因,其中124株携带blaKPC-2基因(89.9%),1株携带blaIMP-4基因。138株肺炎克雷伯菌MLST分型共发现24种不同ST型,包括2种新型别,其中以ST11为主(96株,69.6%),其次ST15有9株,ST437有7株。质粒分型以IncF型多见(100,72.5%)。荚膜类型为K1,K2的菌株分别占5.1%和21.0%。其他毒力因子基因的携带率分别为mrkD (94.2%), entB (73.2%), ybtS (81.2%), fimH (83.3%), kpn (78.3%), alls (2.2%)和kfu(10.1%)。高毒力(高粘)菌株26株,MLST分型以ST11为主,占65.4%(17/26),ST17、ST23和ST716各2株,其他型别3株。其中毒力因子基因rmpA、iutA和wcaG的携带率在高毒力菌株较高,同时携带多个铁转运系统基因(entB+ybtS+iutA)的比例在高毒力菌株中也较高。结论产KPC-2型碳青霉烯酶是我院肺炎克雷伯菌对碳青霉烯酶类耐药的主要原因,ST11为主要克隆菌株。耐药菌株携带的质粒类型以IncF型为主。高毒力菌株MLST分型以ST11为主,RmpA、IutA、Wca及多个铁转运系统协同作用可能与碳青霉烯类耐药菌株表现为高毒性相关。高毒力且多重耐药菌株在我院出现,需引起重视。