S100A8/A9在新生大鼠脓毒症中的表达变化及意义

作     者：高沙沙 

作者单位：苏州大学 

学位级别：硕士

导师姓名：俞生林

授予年度：2013年

学科分类：1002[医学-临床医学] 100202[医学-儿科学] 10[医学] 

主      题：S100A8/A9 TNF-ɑ IL-6 脂多糖 新生儿脓毒症 

摘      要：目的：新生儿对病原微生物高度易感，脓毒症发病率及病死率高。固有免疫是机体抵御病原体感染的第一道防线，固有免疫细胞通过模式识别受体（PRRs）不仅能够识别外源性病原菌相关分子模式（PAMPs），而且能够识别内源性损伤相关分子模式（DAMPs），从而启动机体免疫应答;S100A8／A9蛋白分子是由S100A8和S100A9构成的异二聚体，选择性表达于中性粒细胞、单核巨噬细胞等固有免疫细胞,目前发现其在感染性疾病中有着复杂的生物学功能。本课题通过建立新生大鼠脓毒症模型来分析S100A8／A9在肺、肝组织中的表达以及炎症因子TNF-ɑ、IL-6水平的变化，探讨S100A8／A9在新生大鼠脓毒症发病机制中的作用，从而为脓毒症免疫干预提供新思路。 方法：采用Sprague-Dawley（SD）7日龄大鼠36只腹腔注射脂多糖（LPS）300ug/Kg建立脓毒症模型实验组;同样Sprague-Dawley（SD）7日龄大鼠36只腹腔注射等量生理盐水建立对照组。两组新生大鼠按照随机原则分别于注射后2、4、8、12、24、48h收集肺脏、肝脏并保存，每个时间点均为6只SD大鼠。用Real-time PCR方法检测肺脏和肝脏S100A8、S100A9、TNF-ɑ、IL-6的mRNA水平，免疫组织化学分析的方法检测肺组织、肝组织S100A8／A9蛋白分子的表达。 结果：1. Real-time PCR结果显示，与对照组相比，脓毒症组新生大鼠肝组织和肺组织中S100A8、S100A9、TNF-ɑ的mRNA水平均明显升高，且变化趋势类似。S100A8于2小时开始增加（P0.01），至8小时左右达高峰，一直维持较高水平至48小时;S100A9于2小时开始升高（P0.01），12于小时左右达高峰，至48小时有所下降，但仍高于对照组;TNF-ɑ于2小时开始升高（P0.01），并逐步增高至12小时，48小时仍维持较高水平;2、Real-time PCR结果显示，与对照组相比，脓毒症组肺脏组织IL-6于4小时表达明显升高（P0.01），8小时出现高峰，48小时表达仍高于对照组;肝脏组织IL-6于4小时表达明显升高（P0.01），12小时出现高峰，48小时表达仍维持较高表达水平。3、免疫组化结果显示，在脓毒症组肝肺组织中S100A8／A9异二聚体2小时表达明显增多（P0.01），24小时左右达高峰，48小时仍维持高表达水平。 结论：1、新生大鼠脓毒症发病过程中，随着病情进展，肺、肝组织炎症损伤明显加重，促炎因子TNF-ɑ、IL-6的表达增加，证明炎症损伤是新生儿脓毒症发病早期的主要特征。2、脓毒症新生大鼠肝、肺组织中表达S100A8／A9，并随疾病进展，呈时间依赖性的升高，提示S100A8／A9参与新生儿脓毒症病理生理学过程。3、脓毒症新生大鼠肝、肺组织中促炎因子TNF-ɑ、IL-6的表达与S100A8／A9表达呈正相关，提示S100A8／A9可能与炎症因子产生协同作用，共同加剧新生儿脓毒症的脏器损伤。