间隙连接蛋白Cx32与肝癌发生发展的相关性研究

作     者：王瑜 

作者单位：福建医科大学 

学位级别：硕士

导师姓名：王效民

授予年度：2013年

学科分类：1002[医学-临床医学] 100214[医学-肿瘤学] 10[医学] 

主      题：肝癌 间隙连接蛋白 细胞转染 RNA 干扰 

摘      要：目的1.研究Cx32在肝癌组织及配对癌旁组织、正常肝组织中的表达情况，分析其与肝癌生物学行为关系。2.构建针对Cx32基因的siRNA真核表达质粒，从而为Cx32蛋白的分子生物学研究提供基础。3.建立Cx32蛋白稳定敲低的肝癌HepG2细胞株，并分析该细胞株生物学行为的改变，初步明确Cx32蛋白在肝癌的发生发展过程中的作用。 方法1.应用蛋白质印迹法和逆转录聚合酶链式反应方法检测Cx32在蛋白和mRNA水平在肝癌组织及癌旁组织和正常肝脏组织中的表达水平;通过免疫组化SABC法分别观察HCC组织及癌旁组织和正常肝脏组织中Cx32的表达情况。2.利用基因重组技术，构建Cx32-shRNA真核表达质粒载体。3.转染Cx32-shRNA真核表达质粒载体至肝癌细胞系HepG2细胞中，筛选稳定转染细胞株。4.对构建的稳定表达细胞株进行增殖、侵袭及迁移能力的功能学研究。 结果1. Cx32蛋白在正常肝组织、肝癌组织及癌旁组织中的表达均为阳性，且在肝癌组织的蛋白水平及mRNA水平均低于配对癌旁组织。2.Cx32蛋白在正常肝组织定位于细胞膜，分布较为均匀。在肝癌组织中出现胞浆定位。3.肝癌细胞系HepG2细胞转染针对Cx32的siRNA真核表达质粒载体后，转染细胞中Cx32蛋白表达明显降低。4.成功构建Cx32蛋白的稳转干扰细胞株，其增殖、侵袭及迁移能力均有所提高。 结论1.由正常肝组织向肝癌发展过程中，Cx32蛋白的表达由胞膜定位逐渐改变为胞浆定位。2.在肝癌组织中，Cx32在蛋白及mRNA水平均降低。3.成功构建了pSil-Cx32重组质粒，建立了稳定的Cx32蛋白降表达的HepG2细胞株。4.干扰Cx32蛋白的表达，可增强肿瘤细胞的增殖、侵袭及迁移能力。