胃腺癌中长链非编码RNA RP11-463O9.5的表达及作用的初步研究

作     者：欧阳小娟 

作者单位：福建医科大学 

学位级别：硕士

导师姓名：黄俏佳

授予年度：2016年

学科分类：1002[医学-临床医学] 100214[医学-肿瘤学] 10[医学] 

主      题：长链非编码RNA LncRNA RP11-463O9.5 过表达 胃腺癌组织 胃腺癌细胞 siRNA技术 细胞增殖 细胞迁移和侵袭 细胞凋亡 FOXC2 表达 相关性 

摘      要：目的:研究长链非编码RNA RP11-463O9.5在胃腺癌组织中的表达情况及其与胃腺癌患者临床病理特征之间是否相关;初步探讨LncRNA RP11-463O9.5表达水平的改变对胃腺癌细胞生物学行为的影响;推测LncRNA RP11-463O9.5潜在的下游靶基因。方法:(1)利用高通量芯片技术进行胃腺癌相关LncRNA表达谱检测,筛选出文献未曾报道、具有统计学显著差异性表达的LncRNA作为本课题研究的目标LncRNA。(2)采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)方法进一步验证Lnc RNA RP11-463O9.5在胃腺癌及配对癌旁组织中的表达水平,并结合临床病理资料进行相关性分析。(3)采用si RNA干扰技术下调胃腺癌细胞中Lnc RNA RP11-463O9.5的表达水平,通过CCK-8测增殖、Annexin V-FITC+PI双染联合流式细胞仪测凋亡、划痕损伤实验、Transwell实验等,初步探讨Lnc RNA RP11-463O9.5下调表达对胃腺癌细胞生物学功能的影响。(4)采用qRT-PCR方法验证FOXC2在胃腺癌组织中的表达水平,并分析其与LncRNA RP11-463O9.5表达水平的相关性;采用生物信息学技术进行LncRNA RP11-463O9.5下游靶基因预测,推测其分子调控网络。结果:(1)胃腺癌相关LncRNA表达谱检测结果发现3000多条具有统计学意义的差异表达的LncRNA,其中LncRNA RP11-463O9.5在胃腺癌组织中的表达显著上调,与癌旁组织的比较差异性表达变化倍数为19.76。(2)qRT-PCR结果表明:与癌旁组织相比,Lnc RNA RP11-463O9.5在胃腺癌组织中呈上调表达(P0.05)。(3)LncRNA RP11-463O9.5在4株胃腺癌细胞株中呈上调表达(P0.05)。(4)与癌旁组织相比,FOXC2在胃腺癌组织中呈上调表达(P0.05),上调表达率为63.5%;其表达与LncRNA RP11-463O9.5的表达呈正相关,相关系数R=0.821,P≤0.001;基因预测结果发现,30个基因可能是Lnc RNA RP11-463O9.5的下游靶基因。结论:LncRNA RP11-463O9.5在胃腺癌组织中呈上调表达,其表达水平与胃腺癌患者的TNM分期、淋巴结转移、血管侵袭、神经侵袭密切相关;Lnc RNA RP11-463O9.5在胃腺癌细胞株中呈上调表达,下调LncRNA RP11-463O9.5的表达可抑制胃腺癌细胞的增殖、迁移及侵袭能力,而对胃腺癌细胞的凋亡无影响;FOXC2在胃腺癌组织中呈上调表达,其表达水平与Lnc RNA RP11-463O9.5的表达水平呈正相关。初步结果表明LncRNA RP11-463O9.5可能与胃腺癌相关,可作为胃腺癌的潜在生物标志物。