原发性和复发性人脑星形细胞瘤uPA、PAI-1的表达

作     者：陆丙丁 

作者单位：中国医科大学 

学位级别：硕士

导师姓名：王成林

授予年度：2004年

学科分类：1002[医学-临床医学] 100214[医学-肿瘤学] 10[医学] 

主      题：星形细胞瘤 尿激酶型纤溶酶原激活物 Ⅰ型纤溶酶原激活物抑制剂 

摘      要：目的 uPA和PAI-1是参与纤溶酶原激活系统的一对重要正负调控因子，它们的表达异常与肿瘤的生物学行为密切相关。本实验在检测原发性与复发性人脑星型细胞肿瘤中uPA和PAI-1表达情况的同时，对这两个纤溶酶原激活系统调控因子的表达程度与星行细胞瘤病理分级及与肿瘤复发之间的关系进行了评估。 方法 标本来源 14例原发人脑星形细胞肿瘤标本和8例外伤内减压脑组织所代表的正常脑组织标本均为中国医科大学第二附属医院神经外科1999年4月—2002年3月三年间手术切除标本，15例人脑原发及复发星行细胞瘤标本为中国医科大学第一附属医院神经外科1993-2003间手术切除标本，所有肿瘤标本均按照WHO于1999年制定的神经系统肿瘤分类标准重新确定病理诊断及分级，其中包括WHO Ⅰ级9例、Ⅱ级9例、Ⅲ级11例和Ⅳ级15例。 免疫组化染色方法 全部52例标本经甲醛固定和石蜡包埋后，进行免疫组织化学染色，检测uPA和PAI-1的表达。具体步骤如下：首先将石蜡标本制成5微米厚切片，常规二甲苯脱蜡、酒精脱水后，切片浸入3％ H2O2溶液中，室温下孵育10分钟，以阻断内源性过氧化物酶的活性。切片浸入0.01M枸橼酸溶液(PH=6.0)中，用500W微波炉加热进行抗原修复10分钟。切片滴加正常二抗动物血清封闭，室温下孵育10分钟，消除非特异性反应。切片滴加抗uPA和PAI-1单克隆抗体，在4℃恒温箱中孵育过夜，然后滴加生物素标记的二抗，37℃室温下孵育10分钟。应用超敏SP试剂盒，按照S-P法常规显色。最后切片用苏木素复染切片。 凡细胞浆出现明显棕黄色颗粒者定义为uPA和PAI-1染色阳性细 胞。每张切片随机选择五个高倍视野，各记100个瘤细胞的阳性百分率，取 其均值作为uPA和PAI一1的阳性百分率。 统计学分析方法 应用xZ检验，对正常脑组织和各级别星形细胞肿瘤之间uPA和PAI一1 的表达情况分别进行比较;xZ rx。列联表，分别验证uPA、PAI一1与星形细 胞瘤病理分级之间的关系;配对资料符号序和检验，对复发与原发星形细 胞瘤之间口A、PAI一1的表达情况分别进行比较;Spen等级相关分析 验证upA、PAI一1之间的相关性，定义p蕊0.05为差异有统计学意义。 结果 8例正常脑组织中，均未见uPA，以I一1表达。uPA和PAI一1在44例 星行细胞瘤标本中均有不同程度的表达，其中uPA表达阳性率为81.8%， PAI一1表达阳性率为72.7%。在正常脑组织和星型细胞肿瘤之间、低分化 组(l一W)与高分化组(I一n)之间，uPA和PAI一1的表达程度均有显 著性差异(p0.05，统计学分析无意义。 uPA与 PAI一1在星形细胞瘤复发后表达强度呈递增趋势，但经配对资料符号序和 检验PuPA0 .05，无统计学意义;PPAI一10 .05，有统计学意义。 原发星形细胞瘤中I级2例，11级6例，111级3例，W级4例。复发后3 例组织病理级别不变，n例增加，】例下降，经配对资料的符号序和检验P 蕊0.05，可以认为星形细胞瘤复发后病理级别增高。 讨论 恶性肿瘤侵袭临近正常组织的能力涉及到肿瘤细胞生长和播散到周围 正常组织，在此过程中，肿瘤细胞分泌物以s提供了关键性的细胞分子机 制。纤溶酶原激活系统的尿激酶型纤溶酶原激活物(uPA)是肿瘤侵袭和转 移过程中降解细胞外基质的蛋白水解酶系统的重要成分之一，破坏细胞外 基质和基底膜，在肿瘤侵袭转移中发挥重要的作用。组织细胞的纤溶活动 受纤溶酶原激活物(以。)和纤溶酶原激活物抑制剂(PAI)间动态平衡的调 节。I型纤溶酶原激活物抑制剂(tyl姆一1 plas而nogen activatori司巨bitor， PAI一1)则是uPA主要的生理抑制剂，它在纤溶酶原激活系统中起着重要 的调节作用。在肿瘤的发生和发展过程中，PAs与PAI间平衡的调控机制 丧失。 在多种人类肿瘤中均检测到了uPA和PAI一1的异常表达，其中