低氧对人血管内皮细胞血管紧张素转换酶2表达影响的研究

作     者：姜小飞 

作者单位：四川大学 

学位级别：硕士

导师姓名：曾智

授予年度：2007年

学科分类：1002[医学-临床医学] 100201[医学-内科学(含：心血管病、血液病、呼吸系病、消化系病、内分泌与代谢病、肾病、风湿病、传染病)] 10[医学] 

主      题：人脐静脉内皮细胞 低氧 血管紧张素转换酶2 免疫组织化学 实时荧光定量PCR 

摘      要：目的：①观察低氧环境对人血管内皮细胞血管紧张素2(ACE2)表达的影响;②初步探讨低氧影响人血管内皮ACE2表达的机制。 方法：采用人脐静脉内皮细胞株(HUV-EC-C)，进行贴壁细胞培养;采用免疫组织化学方法对细胞株进行Ⅷ因子鉴定;设立低氧实验组与常氧对照组。低氧组条件为1％O+94％N+5％CO，常氧对照组的细胞置于5％CO孵箱内培养，37℃培养不同时间3h、6h、12h、24h，收集培养液和细胞;采用免疫组化鉴定ACE2蛋白合成情况，实时荧光定量RT-PCR，检测ACE2 mRNA表达情况，并用REST软件进行数据统计分析。 结果：①与常氧组对照，低氧3H，6H，12H，24H组，ACE2蛋白表达均有所下降，χ值分别为825．078、768．141、623．931、350．260，P均小于0．00625。其中低氧3H组的阳性率最低为14．53％，并且随时间呈现逐渐上升趋势;②与常氧对照组相比，低氧3H，6H，12H，24H组，ACE2基因均有所下降。其中低氧3H组ACE2 mRNA相对表达率为0．281(P=0．031)，低氧6H组为0．445(P=0．034)，低氧12H组为0．794(P=0．434)，低氧24H组为0．891(P=0．692)。 结论：在24小时内，低氧使人血管内皮细胞ACE2蛋白的合成以及ACE2mRNA的表达减少，并且以3小时最为明显，后出现逐渐升高趋势。这种先减少后增加的趋势，提示逐渐升高的ACE2对血管内皮缺氧损伤后的RAS的反向调节有着重要作用。