基于TGF-β1/TAK1信号通路观察通心络胶囊干预ISO致大鼠心肌纤维化的实验研究

作     者：左冠超 

作者单位：成都中医药大学 

学位级别：硕士

导师姓名：李胜涛

授予年度：2016年

学科分类：1006[医学-中西医结合] 10[医学] 100602[医学-中西医结合临床] 

主      题：心肌纤维化 TGF-β1/TAK1信号通路 通心络胶囊 异丙肾上腺素 

摘      要：目的探讨通心络胶囊对异丙肾上腺素(Isoprenaline hydro-chloride, ISO)诱导大鼠心肌纤维化(Myocardial Fibrosis, MF)的影响,基于T GF-β1/TAK1信号通路,观察大鼠血清、心肌组织中TGF-β1、TAK1浓度变化,为通心络胶囊防治及逆转心肌纤维化、减缓心肌重构、改善心功能提供一定的实验依据。方法按照随机化数字表法,将50只健康SD大鼠分为5组：空白组、模型组、阳性对照组、通心络胶囊高剂量组(以下简称高剂量组)、通心络胶囊低剂量组(以下简称低剂量组),每组10只。除空白组外,其余各组大鼠采用连续7天背部皮下注射ISO 5mg/(kg·d),复制心肌纤维化模型,空白组背部皮下注射等体积生理盐水。造模的同时开始灌胃给药,空白组、模型组给予等体积生理盐水,阳性对照组给予卡托普利片生理盐水混悬液,通心络胶囊高、低剂量组分别给予通心络胶囊高、低剂量生理盐水混悬液,连续给药21天。灌胃结束后,采用HE、Masson染色法观察心肌病理形态学改变;测定心肌组织胶原容积分数、心脏重量及心脏重量指数;采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清及心肌组织中TGF-β1、TAK1浓度,进行SPSS 210统计学处理。结果1.HE及Masson染色：光镜下药物干预组大鼠心肌组织切片较模型组有不同水平改善：如心肌细胞变形、坏死及纤维化程度明显减轻,炎细胞浸润、间质水肿程度均有减轻,纤维结缔组织增生减少;通心络胶囊高剂量组在心肌组织病理学方面较其他组的改善更为明显。2.心肌组织胶原容积分数(CVF)：与空白组对比,模型组CVF明显增加,差异有统计学意义(P0.05);与通心络胶囊低剂量组相比,通心络胶囊高剂量组心脏重量指数较小(P0.05)4.心肌及血清TGF-β1、TAK1浓度变化：与模型组比较,药物干预组浓度明显降低,统计学有显著差异(P0.01);与卡托普利组相比,通心络胶囊各剂量组浓度较高,差异有统计学意义(P0.01);与通心络胶囊高剂量组比较,通心络胶囊低剂量组浓度较高,差异有统计学意义(P0.01)。5.大鼠心肌及血清中TGF-β1与TAK1相关性分析：本实验发现,空白组血清、心肌组织中TGF-β1与TAK1含量最低,模型组中TGF-β1与TAK1含量最高,二者均呈正相关性(P0.01)。药物干预组血清TGF-β1与心肌组织中TAK1浓度之间呈正相关,具有相关关系(P0.05)。结论连续7天背部皮下注射IS O 5mg/(kg · d)后,大鼠心脏体积增大,重量增加,心肌组织松弛,心室扩张明显,心脏表面不光滑,类似条索状瘢痕。Masson染色显示,心肌细胞明显肿大,变性、局灶性坏死,心肌纤维断裂、排列紊乱,细胞核明显增大变圆,肌丝纹理增粗,可见明显纤维结缔组织增生,心肌纤维化造模成功。血清及心肌中TGF-β1、TAK1明显升高,且具有正相关性。通心络胶囊高、低剂量组能够逆转和改善ISO诱导复制的大鼠心肌纤维化病理改变,降低实验大鼠心脏重量指数,减轻CVF,改善心肌纤维化程度;使血清及心肌组织中TGF-β1、TAK1的浓度降低,并具有正相关性;其机制可能作用于TGF-β1/TAK1信号通路,发挥抗心肌纤维化作用,且通心络胶囊对心肌的保护作用存在剂量依赖性。