小儿牛黄清心散对幼鼠惊厥发作及惊厥性脑损伤作用的研究

作     者：李文娟 

作者单位：重庆医科大学 

学位级别：硕士

导师姓名：蒋莉

授予年度：2014年

学科分类：1008[医学-中药学(可授医学、理学学位)] 1006[医学-中西医结合] 100602[医学-中西医结合临床] 10[医学] 

主      题：小儿牛黄清心散CNQP 惊厥 幼鼠 脑片 谷氨酸 γ-氨基丁酸 自发性兴奋性电流 自发性抑制性电流 小儿牛黄清心散 惊厥 脑损伤 脑保护 IL-1β 凋亡 

摘      要：第一部分小儿牛黄清心散预防大鼠惊厥发作的疗效及可能机制研究 目的：观察小儿牛黄清心散（CNQP）对幼年大鼠惊厥发作的预防效果，探索其对惊厥幼鼠大脑皮层及海马Glu、GABA及神经元放电的影响。 方法：(1)120只21日龄的SD鼠随机分为在体研究组和脑片观察组，比较CNQP对幼鼠惊厥发作的影响：1）在体研究组分为正常对照组、惊厥对照组、L-CNQP、M-CNQP、H-CNQP干预组、安定干预组6个亚组。除正常对照组外，余各组按照实验设计分别给予生理盐水4ml/d、CNQP0.3g/kg/d,8g/kg/d,16g/kg/d、安定5.264mg/kg/d灌胃，早晚2次灌胃，给药1天。在第二次给药结束后30min，除正常对照组外，各组试验动物均腹腔注射PTZ（70mg/kg）。比较各组动物惊厥发作的潜伏期、发作程度、持续时间，动物死亡率，同步脑电图变化。2）组织水平研究的动物仍按上述在体研究分组和给予相应处理，于第二次给药结束后30min，制作急性脑片，记录在无镁人工脑脊液中各组脑片皮层和海马场电位放电波出现的潜伏期、频率及幅度。 (2)将200只21日龄SD鼠按随机数字表法随机分为正常对照组、惊厥对照组、L-CNQP、M-CNQP、H-CNQP干预组。按前述方法予相应处理，在造模后30min及3h时间点，用高效液相色谱法检测各组大鼠皮层及海马中Glu、GABA的含量，同时用膜片钳记录相应时间点皮层、海马CA1区神经元的自发性EPSC和IPSC的情况。 结果：(1) M-CNQP、H-CNQP干预可明显延长戊四唑诱导大鼠惊厥的潜伏期，缩短惊厥发作持续时间，降低动物死亡率（p0.01），同时，抑制脑电图异常放电，(2)M-CNQP、H-CNQP干预可明显降低无镁诱导脑片皮层和海马CA1区的场电位放电波发作率，延长潜伏期，降低场电位的频率及波幅。(3)CNQP可降低惊厥幼鼠脑组织中皮层及海马谷氨酸含量及其介导的EPSC，同时升高惊厥幼鼠脑组织中皮层及海马γ-氨基丁酸的含量及其介导的IPSC;此作用呈剂量依赖性。 结论：CNQP能预防幼年大鼠惊厥的发生，并呈剂量依赖性;CNQP预防幼年大鼠惊厥发作的作用机制可能与调节大脑皮层及海马中Glu、GABA的表达及其介导的自发性EPSC和IPSC的平衡有关。 第二部分小儿牛黄清心散对幼年大鼠惊厥性脑损伤的作用研究 目的：研究小儿牛黄清心散（CNQP）对幼鼠惊厥性脑损伤的作用。 方法：将260只21日龄SD鼠只按随机数字表法分为5组：正常对照组、惊厥对照组、L-CNQP、M-CNQP、H-CNQP干预组。除正常对照组外，各组分别给予生理盐4ml/d、CNQP0.3g/kg/d、8g/kg/d、16g/kg/d,分早晚2次灌胃，给药1d后，给予戊四唑（70mg/kg）腹腔注射，在PTZ注射后4h，12h，24h，48h，72h，7d时间点，取脑组织标本行尼氏染色、采用TUNEL染色法检测大脑皮层和海马神经元的凋亡指数、免疫组化检测IL-1β和胶质纤维性蛋白(GFAP)在脑组织中的表达。 结果：H-CNQP高剂量干预组中各时间点大脑皮层和海马IL-1β和GFAP表达以及细胞凋亡指数显著低于惊厥对照组，与正常对照组比较无显著差异;M-CNQP干预组中上述各指标均较惊厥对照组减少，但仍高于正常对照组;L-CNQP干预组中各指标均与惊厥对照组比较，无显著差异。 结论：CNQP可呈剂量依赖性对惊厥性幼鼠脑损伤起保护作用，其机制可能与降低大鼠海马和皮层中炎性介质IL-1β的表达有关。