不同类型脂肪酸对3T3-L1脂肪细胞脂联素表达的影响及其与PPARγ、Cdk5的关系

作     者：吕玉珊 

作者单位：南方医科大学 

学位级别：硕士

导师姓名：毛丽梅

授予年度：2016年

学科分类：1002[医学-临床医学] 100201[医学-内科学(含：心血管病、血液病、呼吸系病、消化系病、内分泌与代谢病、肾病、风湿病、传染病)] 10[医学] 

主      题：脂肪酸 3T3-L1脂肪细胞 脂联素 PPARγ Cdk5 

摘      要：研究背景脂联素是一种脂肪细胞因子,因其在防治心血管疾病、降低肥胖患者体重、降血糖等方面发挥的作用而备受关注。许多研究表明膳食因素可影响脂联素的表达,以脂肪酸的影响最为显著。而脂肪酸根据其碳链长短及其饱和程度不同可分为饱和脂肪酸、单不饱和脂肪酸和多不饱和脂肪酸。许多研究表明,不同类型脂肪酸的作用存在差异。另有研究发现在脂联素基因的启动子上存在过氧化物酶体增殖物激活受体γ(peroxisome proliferator activated receptor γ, PPARγ)的反应元件,PPARγ激动剂通过上调脂联素的表达进而使胰岛素的敏感性增强。研究还发现,高脂饮食可激活细胞周期性蛋白激酶Cdk5 (Cyclin-Dependent Kinase 5),导致PPARγ第273位的丝氨酸磷酸化,进而降低PPARγ对脂联素的特定靶基因的调控,使脂联素表达降低。那么不同类型的脂肪酸对脂联素表达的影响如何呢?作为PPARγ的天然配体的脂肪酸是否能通过PPARγ和(或者)Cdk5-PPARγ途径来调节脂联素表达呢?研究目的本研究拟以体外培养并诱导分化成熟的3T3-L1脂肪细胞为研究对象,观察不同浓度、不同类型的脂肪酸对3T3-L1成熟脂肪细胞脂联素分泌和表达的影响,发现脂肪酸调节脂联素表达和分泌的规律;观察在不同脂肪酸及同一脂肪酸不同浓度作用下脂联素与PPARy、Cdk5的关系,为进一步探讨脂肪酸调节脂联素表达的分子机制奠定基础。其研究结果将为肥胖及肥胖相关疾病的防治提供新的思路和科学依据。研究方法1.选用不同浓度(25、50、100、200、400μmol/L)的n-3系多不饱和脂肪酸：二十碳五稀酸(EPA)、二十二碳六烯酸(DHA)、α-亚麻酸(a-ALA),n-6系多不饱和脂肪酸：花生四烯酸(AA)、亚油酸(LA),单不饱和脂肪酸：油酸(OA)及饱和脂肪酸：棕榈酸(PA)分别处理体外培养并诱导分化成熟的3T3-L1脂肪细胞24h,同时设空白对照、阴性对照(GW9662)及阳性对照(rosiglitazone),用实时荧光定量PCR法检测处理后胞内脂联素、PPARy及Cdk5基因表达,观察胞内脂联素、PPARy及Cdk5基因表达变化及脂联素与PPARy、Cdk5的相互关系。2.用100及400μmol/L的EPA、DHA、a-ALA、AA、LA、OA、PA处理3T3-L1成熟脂肪细胞,收集胞内蛋白后,用Western-blot法检测胞内脂联素、PPARy及Cdk5的蛋白质相对表达量,观察受试后各组胞内脂联素、PPARy及Cdk5蛋白的变化。3.用100μmol/L的EPA、DHA、a-ALA、AA、LA、OA、PA处理3T3-L1成熟脂肪细胞后,收集细胞培养液,用Western-blot法检测培养液中脂联素蛋白质相对表达量,观察胞外脂联素蛋白表达的变化。4.所得数据采用平均数±标准差(X±S)表示,采用统计软件SPSS19.0进行分析。如果方差齐,组间比较采用单因素方差分析(One Way ANOVA),两两比较采用LSD T-test或dunnett T-test;如果方差不齐,运用Welch法和Dunnett’s T3法分别进行组间比较和两两比较。相关性分析采用Pearson相关分析。P0.05)。(3)不同浓度的α-ALA对脂联素、PPARγ及Cdk5基因表达的影响脂肪细胞经不同浓度的α-ALA处理后,其50、100μmol/L浓度