亚硒酸钠对胃癌细胞株SGC-7901增殖、凋亡及hTERT表达的作用及其机理研究

作     者：王慧 

作者单位：泰山医学院 

学位级别：硕士

导师姓名：苏衍萍

授予年度：2010年

学科分类：1002[医学-临床医学] 100214[医学-肿瘤学] 10[医学] 

主      题：亚硒酸钠 SGC-7901细胞株 细胞凋亡 端粒酶逆转录酶 

摘      要：目的 探讨亚硒酸钠对人胃癌SGC-7901细胞株增殖、凋亡和hTERT表达的作用及其机理。 方法 亚硒酸钠(0、0.5、2.5、5、8μmol/L)的培养液培养SGC-7901细胞24h、48h、72h、96h,用相差显微镜观察亚硒酸钠对SGC-7901形态的影响；MTT法检测亚硒酸钠对SGC-7901的增殖的影响；AnnexinV-FITC/PI双染法检测亚硒酸钠对SGC-7901细胞凋亡的影响；免疫细胞化学SABC法检测亚硒酸钠对SGC-7901 hTERT蛋白表达的影响；RT-PCR检测亚硒酸钠对SGC-7901细胞hTERTmRNA水平表达的影响。 结果 在倒置相差显微镜下可见空白对照组细胞呈上皮型贴壁生长,如铺路石状,细胞轮廓清楚,细胞密集,胞质透亮,细胞生长旺盛,培养液较清澈。在亚硒酸钠作用下,0.5μmol/L,2.5μmol/L组细胞形态无明显改变。5μmol/L,8μmol/L组,细胞间接触变松,贴壁能力减弱,细胞密度降低,细胞开始出现胀亡样改变：细胞肿胀,轮廓不清,立体感差,胞质空泡及颗粒样物质增多,细胞膜破裂、细胞崩解成碎片,漂浮于培养液中,随亚硒酸钠浓度的升高,上述改变更加明显。MTT法检测结果显示：随浓度增加,吸光度值逐渐降低,24h当亚硒酸钠浓度大于2.5μmol/L寸,与空白对照组比较其吸光度值均明显降低(P0.01),48h、96h实验各浓度亚硒酸钠组与空白对照组比较其吸光度值均明显降低(P0.01)。随浓度的增加,亚硒酸钠对SGC-7901细胞增殖抑制率的作用逐渐增加。流式细胞仪检测结果显示：不同时间点0.5μmol/L, 2.5μmol/L亚硒酸钠组均较空白对照组凋亡发生率略有升高,5μmol/L、8μmol/L亚硒酸钠组比空白对照组凋亡率明显升高(P0.01)同一时间点凋亡发生率随亚硒酸钠浓度的增加而升高。免疫细胞化学法检测结果显示：亚硒酸钠能降低SGC-7901细胞中出(?)ERT蛋白免疫细胞化学染色的平均光密度(MOD),24h时5μmol/L、8μmol/L亚硒酸钠组与空白对照组比MOD明显降低(P0.01),48h时0.5μmol/L、5μmol/L、8μmol/L亚硒酸钠组与空白对照组比MOD明显降低(P0.01),72h时2.5μmol/L 5μmol/L、8μmol/L亚硒酸钠组与空白对照组比MOD明显降低(P0.01),96h时各实验组与空白对照组比较MOD均明显降低(P0.01)。同一时间点,随亚硒酸钠浓度的增高hTERT蛋白MOD逐渐降低。RT-PCR检测结果显示：亚硒酸钠能降低SGC-7901细胞中hTERTmRNA的表达,24h时5μmol/L、8μmol/L亚硒酸钠组与空白对照组比较有统计学意义(P0.05),48h,72h,96h时2.5μmol/L、5μmol/L、8μmol/L亚硒酸钠组与空白对照组比较有统计学意义(P0.05)。 结论 亚硒酸钠能抑制SGC-7901细胞生长,诱导其凋亡,其发生可能与下调hTERT表达有关。