茄呢醇提取工艺研究和益妙保尔金米胶囊抗肿瘤活性评价

作     者：胡炜彦 

作者单位：昆明医学院 

学位级别：硕士

导师姓名：张荣平

授予年度：2007年

学科分类：1007[医学-药学(可授医学、理学学位)] 1002[医学-临床医学] 100214[医学-肿瘤学] 10[医学] 

主      题：茄呢醇 含量测定 提取 妙保尔金米胶囊 抗肿瘤活性 

摘      要：【目的】1．建立茄呢醇的含量测定方法，对从烟叶中提取茄呢醇的工艺进行研究;2．评价益妙保尔金米胶囊的抗肿瘤活性及急性毒性。 【方法】1．应用高效液相色谱法，采用DIKma C色谱柱(150 mm×4.6mm，5μm)，甲醇-异丙醇(52：48)作为流动相，流速：0.8 mL／min，检测波长为210 nm，进样量20μL，用标准曲线法测定茄呢醇的含量。2．以游离茄尼醇为指标，采用正交试验及比较试验，考虑提取溶剂、方法、时间等因素，对提取工序进行考察;以游离茄尼醇为指标，采用正交试验，考虑皂化物、溶剂、时间、浓度、温度、皂化溶液体积等因素，对皂化工序进行考察。3．采用改良MTT法，测定益妙保尔金米胶囊对小鼠结肠癌细胞株(CT-26)和胃癌细胞株(MFC)体外生长的抑制率，计算半数抑制浓度IC;将40只CT-26结肠癌皮下接种模型小鼠和40只MFC胃癌皮下接种模型小鼠分别随机分成4组：阴性对照组(等体积生理盐水)、阳性对照组(香菇菌多糖片，0.5 mg／20g／日或康力欣胶囊，0.075g／20g／日)、低剂量组(益妙保尔金米胶囊粉末，0.0834g／20g／日)、高剂量组(益妙保尔金米胶囊粉末，0.2501 g／20g／日)。均采用接种5天后灌胃给药法，持续给药8天，停药24小时后，处死动物。剥离肿瘤，称重并计算抑瘤率;取出脾脏及胸腺，称重并计算脾指数及胸腺指数。 【结果】1．方法学考察结果表明，茄呢醇的线性范围为0.56-2.80μg，相关系数r=0.9995，平均加样回收率100.2％(n=9)，精密度RSD=1.19％;烟叶提取物中游离茄呢醇的含量在8％-12％之间。2．从烟叶中提取茄呢醇的提取、皂化工序工艺参数不同，茄呢醇收率相差极大，本实验所得较好的提取工艺为：10倍量的95％乙醇，50℃回流提取120分钟或超声波连续提取30分钟，较好的皂化条件为：在乙醇溶液中，以3倍量2.0 mol／L的NaOH为皂化试剂，60℃皂化4小时。3．益妙保尔金米胶囊无明显的抑制小鼠结肠癌细胞株(CT-26)和胃癌细胞株(MFC)体外生长的活性，对小鼠结肠癌细胞株(CT-26)和胃癌细胞株(MFC)体内生长显示出了明显的抑制作用，与生理盐水组比较，对小鼠结肠癌细胞株(CT-26)高剂量组的抑瘤率为30.26％，低剂量组的抑瘤率为25.74％，对小鼠胃癌细胞株(MFC)高剂量组的抑瘤率为29.35％，低剂量组的抑瘤率为20.53％。 【结论】1．实验用茄呢醇含量测定方法具有良好的精密度、准确度和灵敏度，以此法测定游离茄呢醇的含量可行。2．益妙保尔金米胶囊粉末对小鼠结肠癌细胞株(CT-26)和胃癌细胞株(MFC)体内生长有一定的抑制作用，且无明显的量效关系。3．采取超声波提取可以大大提高原料的提取效率，从烟叶中提取茄呢醇，提取皂化工序工艺参数选择十分重要，应该进行深入研究。