轮状病毒非结构蛋白NSP3的重组表达及免疫学性质研究

作     者：于洋 

作者单位：中国协和医科大学 

学位级别：硕士

导师姓名：陈元鼎

授予年度：2007年

学科分类：1001[医学-基础医学(可授医学、理学学位)] 100103[医学-病原生物学] 10[医学] 

主      题：轮状病毒 非结构蛋白 NSP3 重组表达 免疫反应性 免疫荧光 

摘      要：轮状病毒属于呼肠病毒科，是世界范围内引起婴幼儿严重腹泻的主要病原体，每年全世界死于轮状病毒感染的儿童约达611000。轮状病毒具有三层衣壳，其基因组由11个分节段的双链RNA组成，编码6个结构蛋白和6个非结构蛋白。根据交叉反应性抗原的不同，轮状病毒分为A-G 7个组，其中只有A、B、C三个组可以感染人类，而引起婴幼儿腹泻的主要为A组，该组是最常见也是最为重要的。A组轮状病毒非结构蛋白NSP3为分子量36kDa的同二聚体，其N端可以结合轮状病毒mRNA3’末端的组特异性四核苷酸共有序列，C端与poly(A)结合蛋白竞争结合真核翻译起始因子eIF4G。NSP3能够关闭宿主细胞mRNA的翻译，并且可能在轮状病毒基因组复制和病毒形态发生中起重要作用。 本研究克隆了A组人轮状病毒TB-Chen株NSP3编码基因，应用质粒pETL作为表达载体构建了重组表达质粒pET-NSP3，并在大肠杆菌BL21(DE3)中高效表达了重组蛋白NSP3，目的蛋白表达量占菌体总蛋白量的28.6％。采用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳分离回收的方法有效地纯化了目的蛋白，并制备了该重组蛋白的免疫豚鼠血清抗体，Western blot分析显示该血清抗体能与重组蛋白NSP3发生特异性免疫反应。免疫荧光实验显示在轮状病毒感染的MA104细胞中NSP3分布在整个细胞质中。NSP3在细胞质中分布形式不一致：有的分布弥散、均匀;有的既有弥散分布，又呈现颗粒状，并且这些颗粒更多地出现在细胞核周围。这些结果为进一步研究TB-Chen株轮状病毒NSP3的结构、功能和免疫学性质奠定了基础。