ORAI1与结肠癌细胞系SW480生物学特性关系的研究

作     者：康清杰 

作者单位：重庆医科大学 

学位级别：硕士

导师姓名：向征

授予年度：2015年

学科分类：1002[医学-临床医学] 100214[医学-肿瘤学] 10[医学] 

主      题：ORAI1 SW480 SOCE 增殖 转移 

摘      要：目的：应用RNA干扰技术沉默ORAI1基因的表达,探讨ORAI1对结肠癌细胞系SW480增殖、转移的影响及其机制。方法：以重组慢病毒感染SW480细胞,实验设对照组、空病毒组、干扰组,分别用实时荧光定量PCR和Western- blot检测三组细胞中ORAI1基因mRNA和蛋白的表达变化,MTT法、平板克隆、倍增时间检测三组细胞的增殖情况;Transwell小室、粘附实验、血管形成及拟态分别检测细胞侵袭、迁移能力,同、异种细胞间粘附及血管生成能力;流式细胞仪检测其周期变化,激光共聚焦显微镜检测三组细胞中钙库调节的钙内流SOCE的差异,Western-blot法检测三组细胞中ERK1/2、p-ERK1/2、CyclinD1、MMP-2、VEGF和E-cadherin蛋白的表达结果：SW480转染ORAI1干扰慢病毒72h后,可见明显的荧光表达;较空病毒组和对照组,干扰组细胞ORAI1的表达明显降低(P0.01),细胞生长减慢(P0.05),克隆形成能力减弱(P0.01),倍增时间延长(P0.01);细胞侵袭和迁移能力减弱(P0.01);同种细胞粘附能力增强(P0.05);异种细胞粘附能力减弱(P0.05);血管生成能力减弱(P0.01);G1期细胞比例显著增高(P0.05);SOCE内流峰值降低(P0.05);p-ERK1/2、CyclinD1、MMP-2和VEGF的表达降低(P0.01)、E-cadherin表达增加(P0.01)。结论：ORAI1可以促进结肠癌细胞系SW480的增殖和转移,其机制可能与SOCE增加有关。