HLA-G在人食管鳞癌中的表达及意义

作     者：赵勇 

作者单位：第四军医大学 

学位级别：硕士

导师姓名：王为忠;郑建勇

授予年度：2009年

学科分类：1002[医学-临床医学] 100214[医学-肿瘤学] 10[医学] 

主      题：食管鳞状细胞癌 HLA-G sHLA-G IL-10 RT-PCR 免疫组化 ELISA 

摘      要：背景及目的食管癌在世界的发病率很高,在恶性肿瘤中发病率位居第四位。我国食管癌90%以上是鳞状细胞癌,死亡率在世界各国中位居第一,成为预后最差的消化系统肿瘤之一,因早期食管癌症状不明显,大部分食管癌患者确诊时已属中晚期。以手术为主治疗后的5年生存率一直徘徊在25-30%。临床和病理研究尚未揭示食管癌背后复杂的生物学机理,食管癌的病因和发病机制仍不十分明确,因此难以做到食管癌的早发现、早诊断、早治疗。因此从多角度研究肿瘤的发病机理,寻找可能存在的食管癌的各种标志物以用于食管癌的早期诊断、治疗效果评价和术后随访已经成为当务之急。 人类白细胞抗原G(HLA-G)由HLA-I类基因编码,最早在胎盘绒毛膜外滋养层细胞发现其有所表达,并证实在胎儿免疫耐受中起重要作用。随后研究证实HLA-G在生理、病理情况下存在组织特异性表达,并认为HLA-G在肿瘤免疫逃逸中可能具有重要作用。近年来,在人类结肠癌、黑色素瘤,乳腺癌,肾癌,神经胶质瘤,肺癌及淋巴瘤中都发现有HLA-G的表达,它与肿瘤的大小、分化程度及肿瘤转移之间有密切关系。肿瘤细胞也可异常分泌可溶性HLA-G(sHLA-G)分子,而sHLA-G具有免疫抑制功能。研究发现,肿瘤患者外周血sHLA-G水平与其预后密切相关。IL-10是肿瘤发生发展过程中一种重要的负性免疫调节细胞因子,用RT-PCR方法检测发现在多种肿瘤组织中均可检测到IL-10,包括食管癌,宫颈癌,淋巴瘤和黑色素瘤等,而在正常组织中IL-10 mRNA不表达或表达量极少。大量研究表明IL-10可以上调肿瘤细胞HLA-G的表达水平。虽然研究证实HLA-G与多种肿瘤的免疫逃逸存在相关性,但是关于HLA-G在食道癌中表达情况尚未见报道。本研究的目的是通过研究HLA-G在食管癌中的表达情况,探讨HLA-G在食管鳞状细胞癌中的作用,以及IL-10对sHLA-G表达水平的影响。 方法本研究收集60例食管鳞癌组织和对应的病人术前血液标本,28例健康正常人血液及正常食管组织标本,采用免疫组化、逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)、酶联免疫吸附试验(ELISA)等方法和技术,观察:(1)食管鳞癌组织中HLA-G的表达及意义;(2)食管鳞癌病人外周血sHLA-G表达水平及意义;(3)食管鳞癌病人外周血IL-10对sHLA-G表达水平的影响。 结果(1)HLA-G蛋白在食管鳞癌中的阳性表达率为70%(42/60),阴性表达率为30%(18/60),HLA-G在癌旁非肿瘤的食管鳞状上皮组织阳性表达率为8.3%(5/60),阴性表达率为91.7%(55/60),并有显著性差异(P0.05),正常食管组织中未见有HLA-G表达。HLA-G阳性表达程度与食管鳞癌分化程度和淋巴结转移显著相关(P0.05),而与患者的年龄、性别、肿瘤位置、肿瘤大小、侵袭程度及TNM分期无关;(2)HLA-G mRNA在25例食管鳞癌组织和对应的癌旁组织中的表达率分别为84%(21/25)和16%(4/25),HLA-G5 mRNA在25例食管鳞癌组织和对应的癌旁组织中的表达率分别为80%(20/25)和8%(2/25);而正常食管组织中未见有HLA-G mRNA表达,HLA-G mRNA与蛋白表达具有一致性。(3)60例食管鳞癌病人血清sHLA-G和IL-10平均值分别为15.04u/ml(4.33-250.00u/ml)和23.86pg/ml(3.33-85.60pg/ml),28例健康正常人血清sHLA-G及IL-10平均值分别为6.81u/ml(0-29.27u/ml),12.81pg/ml(0.20-27.07pg/ml)。食管鳞癌病人血清sHLA-G及IL-10水平均较健康对照者显著升高(P0.05),血清中sHLA-G水平与IL-10的表达水平正相关(r=0.353,P=0.006)。 结论(1)HLA-G分子在食管鳞癌中呈高表达状态,可能参与了食管癌的发生及发展过程;(2)可溶性HLA-G分子水平在食管鳞癌外周血中升高,可能与IL-10水平上调有关;(3)HLA-G分子可能成为临床食管癌早期诊断的一种生物学指标。