VEGF，VEGFR-3，Ang-2，ES与喉鳞癌转移的相关性研究

作     者：王娟 

作者单位：河北医科大学 

学位级别：硕士

导师姓名：王宝山

授予年度：2009年

学科分类：1002[医学-临床医学] 100214[医学-肿瘤学] 10[医学] 

主      题：喉鳞癌 Hep-2细胞 转移 血管 HIF-1α VEGF VEGFR-3 Ang-2 ES 

摘      要：目的:头颈肿瘤也同其它大多数实体肿瘤一样,瘤体内的部分细胞处于缺氧环境之中。肿瘤持续性生长和转移需要有新生血管的形成,以新生血管为靶点对肿瘤进行生物学治疗已成为近几年新的研究热点。本实验主要是研究喉鳞癌大体临床标本及简单模拟实体瘤内部常氧和低氧条件(Hypoxia Inducible Factor 1 alpha ,HIF-1α)下与血管生成相关的四个指标(vascular endothelial growth factor ,VEGF;vascular endothelial growth factor receptor 3 ,VEGFR-3;angiopoietin 2,Ang-2;endostatin ,ES)的表达,探讨各个蛋白在喉鳞癌转移过程中的确切作用。为头颈肿瘤的治疗奠定实验基础。 方法: 1.将所有大体临床标本经4%中性甲醛液固定,石蜡包埋,5μm连续切片,利用免疫组织化学PV(Polymer Conjugated)法即用型二步法(非生物素)检测法,检测HIF-1α、VEGF、VEGFR-3、Ang-2和ES的表达。 2.人喉鳞癌(Hep-2)细胞培养于含10%新生小牛血清、青霉素(l00U/ml)、链霉素(l00μg/ml)的RPMI-1640培养基中,常规传代培养,置于37℃,5%CO2,20%O2(常氧)或37℃,5%CO2,2%O2,94%N2(低氧)的培养箱中。待细胞进入对数生长期后,将细胞分为2组:A组(常氧24h组)、B组(低氧24h组)。收集各组细胞。流式细胞仪检测HIF-1α、VEGF、VEGFR-3、Ang-2、ES蛋白表达;细胞爬片免疫组化检测各组细胞HIF-1α、VEGF、VEGFR-3、Ang-2、ES蛋白表达;RT-PCR检测各组细胞HIF-1α、VEGF、VEGFR-3、Ang-2、ESmRNA。 结果: 1.免疫组织化学结果:喉鳞癌大体标本中HIF-1α阳性颗粒呈棕黄色,主要定位于癌灶肿瘤细胞胞浆和或胞核中,与癌旁正常组织比较有显著性差异(t=14.3932,P0.05),而有无淋巴结转移比较差异有显著性(p0.05)。ES阳性颗粒主要定位于肿瘤细胞的细胞浆中,显著高于癌旁正常组织(t=7.263 p0.05)。 2.免疫细胞化学结果:HIF-1α蛋白主要位于胞浆,胞核内亦可见其表达,呈棕黄色,且低氧24h组高于常氧24h组,差异有统计学意义(P0.05),与ES的表达呈负相关(r=-0.268 P0.05);VEGF与VEGFR-3的表达呈高度正相关(r=0.7365,P0.05);Ang-2的表达与VEGF的表达呈高度正相关(r=0.8193,P0.01),与ES的表达呈正相关(r=0.38 P0.05)。 结论: 1.低氧能明显促进肿瘤细胞HIF-1α蛋白的表达,且这一作用发生在mRNA水平;2. HIF-1α蛋白表达的增强促进了VEGF、VEGFR-3、Ang-2蛋白的表达,且成明显的正相关;3. HIF-1α蛋白表达的增强抑制了ES蛋白的表达,且成负相关。