AOPP对MRC-5细胞增殖及FN、Collagen I表达的影响

作     者：张帮艳 

作者单位：遵义医学院 

学位级别：硕士

导师姓名：张湘燕

授予年度：2017年

学科分类：1002[医学-临床医学] 100201[医学-内科学(含：心血管病、血液病、呼吸系病、消化系病、内分泌与代谢病、肾病、风湿病、传染病)] 10[医学] 

主      题：晚期氧化蛋白产物 人胚肺成纤维细胞 氧化应激 NADPH氧化酶 

摘      要：目的:研究晚期氧化蛋白产物(7)advanced oxidation protein products,AOPP(8)对人胚肺成纤维细胞(human embryonic lung fibroblasts MRC-5,MRC-5)活性氧自由基(7)reactive oxygen species,ROS(8)及细胞外基质纤维连接蛋白(fibronectin,FN)及I型胶原(collagen I,Col I)的作用。方法:1.将MRC-5细胞分为人血清白蛋白(human serum albium,HSA)组,AO-PP时间效应组(7)0、12、24、48及72小时(8)和浓度效应组(7)0、50、100、200及400μg/ml(8),NADPH氧化酶抑制剂夹竹桃麻素(7)apocynin,APO(8)组(7)AOPP+APO(8)。2.用上述不同浓度的AOPP与MRC-5细胞共同培养不同的时间,MTT法检测细胞的活力。3.采用ELISA法检测FN、Col I及转化生长因子(7)transforming growth factor-β1,TGF-β1(8)在细胞上清中的浓度,通过RT-PCR检测各组细胞上述3个指标m RNA的表达。4.根据MTT实验结果选取AOPP作用最佳的时间点和浓度点刺激MRC-5细胞;流式细胞仪和荧光显微镜检测活性氧自由基ROS的表达。***氧化酶抑制剂APO与MRC-5细胞预孵育1小时,加入200μg/ml AOPP刺激48小时,观察细胞内ROS的变化,从蛋白和基因水平检测FN、Col I及TGF-β1的表达。结果:1.不同浓度的AOPP(50、100、200、400μg/ml)作用于MRC-5细胞12、24、48及72小时,发现AOPP对MRC-5细胞具有显著的增殖作用(P0.05)。***-5细胞与200μg/ml AOPP作用48小时,与对照组相比,细胞内ROS水平显著升高(P0.05﹚。结论:AOPP能够促进体外MRC-5细胞的增殖,引起细胞外基质FN、Col I表达上调及肺纤维化相关生长因子TGF-β1的表达增加,初步推测可能与NADPH氧化酶介导产生的ROS有关。