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晚期氧化蛋白产物诱导HaCaT细胞凋亡的实验研究

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解放军医学杂志 2016年第5期41卷 373-377页

作者：孙百慧李勤丁若汀余文林吴燕虹广州南方医科大学研究生学院 510515 广州军区广州总医院激光整形中心广州510010

目的探讨晚期氧化蛋白产物(AOPPs)对HaCaT细胞凋亡的影响及其可能的作用机制。方法人血清白蛋白(HSA)与次氯酸钠溶液反应制成AOPPs。MTT法检测经不同浓度(0、50、100、200、400μg/ml)AOPPs处理24h后HaCaT细胞的活力,以选择AOPPs的工作... 详细信息

目的探讨晚期氧化蛋白产物(AOPPs)对HaCaT细胞凋亡的影响及其可能的作用机制。方法人血清白蛋白(HSA)与次氯酸钠溶液反应制成AOPPs。MTT法检测经不同浓度(0、50、100、200、400μg/ml)AOPPs处理24h后HaCaT细胞的活力,以选择AOPPs的工作浓度。根据时间效应或浓度效应对HaCaT细胞进行分组处理,流式细胞技术检测细胞凋亡率,二氯荧光素双醋酸盐(DCFH-DA)法检测细胞内活性氧(ROS)水平,Western blotting技术检测细胞内NOX4、Bax及Bcl-2蛋白的表达。结果 400μg/ml AOPPs作用后HaCaT细胞活力较其他浓度明显降低(P蛋白表达量增加(P蛋白表达量降低(P氧化酶途径诱导HaCaT细胞凋亡。

关键词：晚期氧化蛋白产物 HaCaT细胞活性氧细胞凋亡

晚期氧化蛋白产物对小鼠腹腔巨噬细胞产生一氧化氮的影响

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南方医科大学学报 2006年第5期26卷 558-560页

作者：李忠海刘尚喜侯凡凡王燕群南方医科大学南方医院肾内科广东广州510515

目的研究晚期氧化蛋白产物(AOPP)对小鼠腹腔巨噬细胞(MPM)产生一氧化氮的影响。方法用次氯酸氧化牛血清白蛋白(BSA)制备的AOPP-BSA单独或与内毒素(LPS)一起与MPM共同培养或用AOPP-BSA预处理后再用LPS刺激MPM,用Griess试剂法测定培养上... 详细信息

目的研究晚期氧化蛋白产物(AOPP)对小鼠腹腔巨噬细胞(MPM)产生一氧化氮的影响。方法用次氯酸氧化牛血清白蛋白(BSA)制备的AOPP-BSA单独或与内毒素(LPS)一起与MPM共同培养或用AOPP-BSA预处理后再用LPS刺激MPM,用Griess试剂法测定培养上清一氧化氮的含量;MTT法测定细胞活力。结果AOPP修饰可使BSA诱导MPM产生一氧化氮的量显著性降低。同时,AOPP-BSA预处理或与LPS一起共同刺激巨噬细胞均可显著性抑制LPS诱导的MPM产生一氧化氮,抑制程度与BSA的氧化修饰程度AOPP-BSA的浓度有关。结论晚期氧化蛋白产物可抑制MPM诱导型一氧化氮的产生。

关键词：晚期氧化蛋白产物氧化应激巨噬细胞一氧化氮

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晚期氧化蛋白产物的制备及纯化

中国组织工程研究与临床康复 2009年第28期13卷 5544-5548页

作者：田梅易维京余荣杰吴雄飞解放军第三军医大学西南医院肾科重庆市400038 解放军第三军医大学检验系临床生化教研室重庆市400038

背景:晚期氧化蛋白产物是血液透析患者免疫功能紊乱、加速性动脉粥样硬化、透析相关性淀粉样变等长期并发症的重要致病环节。但是对于晚期氧化蛋白产物的基础性研究相对较少。主要原因之一就是不能获得高纯度且具有生物学活性的晚期氧... 详细信息

背景:晚期氧化蛋白产物是血液透析患者免疫功能紊乱、加速性动脉粥样硬化、透析相关性淀粉样变等长期并发症的重要致病环节。但是对于晚期氧化蛋白产物的基础性研究相对较少。主要原因之一就是不能获得高纯度且具有生物学活性的晚期氧化蛋白产物。目的:制备及纯化晚期氧化蛋白产物,并对其进行鉴定,以寻求一种制备高纯度且具生物活性的晚期氧化蛋白产物的方法。设计、时间及地点:单一样本观察,于2008-09/10在解放军第三军医大学检验系临床生化教研室完成。材料:人血白蛋白为成都容生有限公司产品,Hitrap26/60sephacryl S-300为GE Healthcare产品。方法:首先纯化人血白蛋白,将纯化的人血白蛋白与次氯酸体外孵育法制备晚期氧化蛋白产物-人血白蛋白,经Hitrap26/60 sephacryl S-300分离纯化。并经变性及非变性电泳、分子筛蛋白标准鉴定其相对分子质量,经单核细胞肿瘤坏死因子α分泌实验鉴定其结构特征和生物学活性。主要观察指标:①人血白蛋白的纯化及电泳结果。②晚期氧化蛋白产物纯化及电泳结果。③晚期氧化蛋白产物-人血白蛋白促单核细胞肿瘤坏死因子α分泌的量效关系。结果:经变性及非变性电泳、分子筛蛋白标准鉴定其相对分子质量为670000,能够显著刺激单核细胞肿瘤坏死因子α的分泌,时间效应显示AOPPs-HSA(1g/L)刺激6h,单核细胞肿瘤坏死因子α的分泌量就已显著性升高,12h升至最高水平。结论:采用上述方法能够制备及纯化晚期氧化蛋白产物,且纯化后的晚期氧化蛋白产物具有生物学活性,为晚期氧化蛋白产物的进一步研究奠定了基础。

关键词：晚期氧化蛋白产物纯化凝胶层析人血白蛋白

晚期氧化蛋白产物对人巨噬细胞产生NO、ROS的影响及复方黄甘提取物的干预

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中成药 2013年第8期35卷 1587-1593页

作者：毛萍莫立乾肖小燕宋少练杨西晓南方医科大学南方医院药学部广东广州510515

目的研究晚期氧化蛋白产物对人巨噬细胞产生一氧化氮(NO)和活性氧(ROS)的影响以及复方黄甘提取物(大黄、甘草等)对其的干预。方法人巨噬细胞与晚期氧化蛋白产物共同培养24 h,再给予复方黄甘提取物继续培养24 h后,用Griess还原法测定培... 详细信息

目的研究晚期氧化蛋白产物对人巨噬细胞产生一氧化氮(NO)和活性氧(ROS)的影响以及复方黄甘提取物(大黄、甘草等)对其的干预。方法人巨噬细胞与晚期氧化蛋白产物共同培养24 h,再给予复方黄甘提取物继续培养24 h后,用Griess还原法测定培养上清一氧化氮(NO)的水平变化,RT-PCR法测定诱导型一氧化氮合酶(iN-OS)的基因表达变化,DCFH-DA荧光探针法测定ROS水平的变化;分别用NF-κB抑制剂吡咯烷二硫代氨基甲酸盐、NADPH氧化酶抑制剂二亚苯基碘和复方黄甘提取物预处理细胞1 h,再用晚期氧化蛋白产物刺激,24 h培养结束后测定ROS水平的变化,RT-PCR和ELISA法分别测定细胞因子TNF-α、IL-1β和IL-6的基因表达及蛋白分泌。结果晚期氧化蛋白产物丧失了诱导人巨噬细胞产生NO的能力,但能升高ROS的产生量,同时TNF-α、IL-1β和IL-6的基因表达和蛋白分泌也显著性升高。当给予复方黄甘提取物继续培养后,可显著性地增加NO水平,降低ROS水平;当给予复方黄甘提取物预处理细胞时,也能降低ROS水平,同时降低TNF-α、IL-1β和IL-6的基因表达和蛋白分泌。结论复方黄甘提取物延缓肾衰的进程可能是通过产生NO来减轻其微炎症反应和通过消除ROS来减弱其氧化应激损伤途径实现的。

关键词：晚期氧化蛋白产物巨噬细胞一氧化氮活性氧

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晚期氧化蛋白产物抗体的制备和鉴定

第三军医大学学报 2009年第20期31卷 1973-1976页

作者：田梅易维京吴雄飞余荣杰第三军医大学西南医院肾科重庆400038 第三军医大学医学检验系暨药学院临床生物化学教研室重庆400038

目的制备和鉴定抗人晚期氧化蛋白产物(AOPPs)单克隆抗体(McAb)。方法用次氯酸(HOCl)和纯化的人血白蛋白(HSA)孵育获得AOPPs-HSA,取凝胶层析纯化后的第1峰免疫BALB/c小鼠,采用杂交瘤技术制备抗AOPPs-HSA的McAb,用间接ELISA、Western blo... 详细信息

目的制备和鉴定抗人晚期氧化蛋白产物(AOPPs)单克隆抗体(McAb)。方法用次氯酸(HOCl)和纯化的人血白蛋白(HSA)孵育获得AOPPs-HSA,取凝胶层析纯化后的第1峰免疫BALB/c小鼠,采用杂交瘤技术制备抗AOPPs-HSA的McAb,用间接ELISA、Western blot鉴定其特异性及亚类。结果成功筛选出3株稳定分泌抗AOPPs,1株既抗HSA又抗AOPP的McAb杂交瘤细胞株,其分泌抗体亚类3株为IgG1,1株为IgG2b,间接ELISA和Westernblot证明制备的抗体可以特异地和天然或体外制备的AOPPs结合。结论获得抗人AOPPs-HSA的McAb细胞株4株,为进一步研究AOPPs生物学活性及其相关疾病的诊断和预后奠定基础。

关键词：晚期氧化蛋白产物单克隆抗体制备和鉴定

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晚期氧化蛋白产物诱导内皮细胞产生活性氧

第一军医大学学报 2004年第12期24卷 1350-1352页

作者：袁方刘尚喜田建伟南方医科大学南方医院肾内科广东广州510515

目的探讨晚期氧化蛋白产物(AOPP)对内皮细胞产生活性氧的影响及机制。方法体外用次氯酸氧化牛血清白蛋白(BSA)制备AOPP-BSA,以内皮细胞株ECV304为内皮细胞模型,用VICTOR1420多标记分析系统动态检测细胞氧化2,7-二氢二氯荧光素(DCFH)产... 详细信息

目的探讨晚期氧化蛋白产物(AOPP)对内皮细胞产生活性氧的影响及机制。方法体外用次氯酸氧化牛血清白蛋白(BSA)制备AOPP-BSA,以内皮细胞株ECV304为内皮细胞模型,用VICTOR1420多标记分析系统动态检测细胞氧化2,7-二氢二氯荧光素(DCFH)产生的荧光量,间接反映活性氧的产生量。结果AOPP能诱导内皮细胞产生活性氧。活性氧的产生量随BSA氧化程度的升高和AOPP-BSA浓度的增加而增多。用硒谷胱甘肽过氧化物酶小分子模拟物ebselen和NADPH氧化酶抑制剂apocynin预处理细胞,可分别将AOPP-BSA诱导产生的活性氧抑制65%和29%。结论AOPP能够诱导内皮细胞产生活性氧,其部分机制可能与NADPH氧化酶激活有关。

关键词：晚期氧化蛋白产物 ECV304 活性氧 NADPH氧化酶

晚期氧化蛋白产物通过ERK通路促进ECV304细胞基质细胞衍生因子-1α的表达

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中国应用生理学杂志 2013年第2期29卷 142-146页

作者：史春虹姜一农单路娟路岩张英高彦国大连医科大学附属一院内分泌科辽宁大连116011 大连医科大学附属一院心内科辽宁大连116011 大连医科大学附属一院中心实验室辽宁大连116011 大连大学附属新华医院辽宁大连116011

目的:观察晚期氧化蛋白产物(AOPP)对ECV304细胞基质细胞衍生因子1α(SDF-1α)表达的影响,并探讨其作用机制。方法:牛血清白蛋白(BSA)与次氯酸钠等量混合体外制备AOPP-BSA,不同浓度AOPP-BSA作用后以RT-PCR法检测ECV304细胞SDF-1αmRNA的... 详细信息

目的:观察晚期氧化蛋白产物(AOPP)对ECV304细胞基质细胞衍生因子1α(SDF-1α)表达的影响,并探讨其作用机制。方法:牛血清白蛋白(BSA)与次氯酸钠等量混合体外制备AOPP-BSA,不同浓度AOPP-BSA作用后以RT-PCR法检测ECV304细胞SDF-1αmRNA的表达,Western-blot法测定SDF-1α以及磷酸化细胞外信号调节激酶(p-ERK)蛋白水平,阻断实验中先以不同浓度的ERK特异性阻断剂U0126与ECV304孵育1 h,然后与AOPP-BSA共同孵育24 h,酶联免疫吸附法测定上清液中SDF-1α蛋白浓度。结果:AOPP呈浓度依赖性的促进ECV304细胞SDF-1αmRNA表达及蛋白合成增加(P均蛋白合成的促进作用(P<0.05)。结论:AOPP可诱导ECV304细胞SDF-1α的表达,ERK1/2通路是介导这一作用的重要途径之一。

关键词：晚期氧化蛋白产物基质细胞衍生因子let ECV304

晚期氧化蛋白产物通过 NADPH 氧化酶途径诱导MC3 T3-E1细胞产生ROS

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中华内分泌代谢杂志 2016年第5期32卷 405-410页

作者：娄爱菊吴炜戎何可人蔡梓红林启旺胡梦琳莫剑玲蔡晓燕谢启新蒋春梅王簕广州医学院荔湾医院风湿肾内科 510170 广州医科大学第三临床学院 510150 广州医科大学附属第三医院骨科 510150

目的：研究晚期氧化蛋白产物（ AOPP ）通过 NADPH 氧化酶途经诱导小鼠成骨样细胞（MC3T3-E1）产生ROS。方法实验分为空白对照组、RSA（鼠血清白蛋白）组、AOPP组。培养MC3T3-E1细胞,加入RSA和不同浓度的AOPP,用2,7-二氯二氢荧光素二乙... 详细信息

目的：研究晚期氧化蛋白产物（ AOPP ）通过 NADPH 氧化酶途经诱导小鼠成骨样细胞（MC3T3-E1）产生ROS。方法实验分为空白对照组、RSA（鼠血清白蛋白）组、AOPP组。培养MC3T3-E1细胞,加入RSA和不同浓度的AOPP,用2,7-二氯二氢荧光素二乙酯为荧光探针流式细胞仪检细胞内活性氧簇（ROS）的生成量。在阻断实验中,MC3T3-E1细胞分别与各种可能产生活性氧的酶的抑制剂孵育后加入AOPP,观察阻断剂对ROS生成的阻断作用。采用Western印迹和免疫荧光法观察NADPH氧化酶亚基的变化。结果分别采用50、100、200μg/ml AOPP刺激MC3T3-E1细胞,细胞ROS的生成随着AOPP浓度的升高而逐渐增加,其中200μg/ml AOPP产生的ROS最多（P〈0.05）。 AOPP诱导MC3T3-E1生成ROS还表现为时间依赖性,AOPP刺激30 min即可引起ROS生成增加（P〈0.05）,3 h达峰。加入不同的酶阻断剂后,仅NADPH氧化酶抑制剂二苯碘鎓（ DPI）、夹竹桃麻素（ apocynin）、胞浆型超氧化物歧化酶C-SOD抑制了ROS的生成（P〈0.05）。同时,AOPP刺激后p47phox有明显的膜迁移,并可诱导MC3T3-E1细胞Nox4蛋白表达上调。结论 AOPP通过NADPH氧化酶途径诱导MC3T3-E1细胞产生ROS,推测这可能是AOPP参与骨质疏松发病的机制。

关键词：晚期氧化蛋白产物成骨样细胞活性氧 NADPH氧化酶

晚期氧化蛋白产物对人胚肺成纤维细胞增殖及细胞外基质分泌的影响

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中华结核和呼吸杂志 2018年第5期41卷 373-376页

作者：张帮艳刘维佳徐述雄饶珊珊李丹邵松军叶贤伟张湘燕韩婧贵州省人民医院呼吸与危重症医学科贵阳550002 贵州省人民医院泌尿外科贵阳550002

肺纤维化的主要病理特征是持续的肺泡上皮细胞损伤,成纤维细胞/肌成纤维细胞的异常增殖并过度分泌细胞外基质（extracellular matrix,ECM）导致正常肺结构被破坏,最终形成肺纤维化.其发病率高,发病机制不清,缺乏有效治疗手段,临床预后差... 详细信息

肺纤维化的主要病理特征是持续的肺泡上皮细胞损伤,成纤维细胞/肌成纤维细胞的异常增殖并过度分泌细胞外基质（extracellular matrix,ECM）导致正常肺结构被破坏,最终形成肺纤维化.其发病率高,发病机制不清,缺乏有效治疗手段,临床预后差.研究表明氧化应激与肺纤维化密切相关.Daniil等在肺纤维化患者的肺组织中发现脂质过氧化物产生增多,且严重程度与氧化应激水平呈正相关.

关键词：肺成纤维细胞增殖晚期氧化蛋白产物细胞外基质分泌氧化应激水平分泌细胞外基质肺纤维化人胚上皮细胞损伤