Stat3反义寡核苷酸增强放疗对喉癌Hep-2细胞杀伤和抑制作用的分子机制

作     者：卞新华 

作者单位：河北医科大学 

学位级别：硕士

导师姓名：李晓明

授予年度：2008年

学科分类：1002[医学-临床医学] 100214[医学-肿瘤学] 10[医学] 

主      题：STAT3 喉癌Hep-2细胞 反义寡核苷酸 放疗 细胞周期 p-stat3 cyclinD1 p21、CDK4 

摘      要：目的:通过stat3反义寡核苷酸(ASODN)转染与60CO照射喉癌Hep-2细胞株探讨对Hep-2细胞株增殖抑制、细胞周期变化、蛋白表达的影响从而探讨基因治疗与放疗作用之间协同作用的机制。 方法:首先在370C、5%CO2、20%O2和95%湿度条件下的湿润恒温培养箱中培养人喉鳞状细胞癌Hep-2细胞,取对数生长期细胞,分别用于以下实验: 1.倒置荧光显微镜下观察stat3ASODN转染、60CO放疗及ASODN转染+60CO放疗作用后Hep-2细胞细胞形态学改变。 2.结晶紫法检测不同浓度stat3ASODN +60CO放疗作用后Hep-2细胞增殖抑制率。 3.台盼蓝排除实验计数不同条件下细胞死亡率。 4.流式细胞术检测5Gy60CO放疗作用前后及200nmol/l、stat3ASODN、stat3SODN转染前后Hep-2细胞的stat3、p-stat3蛋白表达对细胞周期相关蛋白cyclinD1、p21、cdk4表达的影响及其与细胞抑制率的关系。 5.流式细胞学检测不同浓度反义寡核苷酸转染联合定量放疗对Hep-2细胞细胞周期及stat3、p-stat3、yclinD1、p21、cdk4蛋白表达的影响。 结果: ***3ASODN+5Gy60CO放疗联合作用后细胞形态与单纯放疗和单纯ASODN转染后细胞比较,其形态学改变更加显著,悬浮细胞数量明显增加。 ***+放疗组对细胞增殖抑制的影响明显大于单纯放疗和单纯ASODN转染作用。 3.单纯放疗组(5Gy)和单纯ASODN转染组(200 nmol/l)的细胞死亡率比空白对照组增高,而转染+放疗组细胞死亡率较单纯放疗组和单纯ASODN转染组显著增高。 4.实验结果显示:反义治疗组的stat3、p-stat3蛋白荧光指数低于空白对照组、脂质体转染组,反义转染+放疗组比单纯放疗组和单纯反义转染组荧光指数降低更加显著。Pearson相关性分析结果显示stat3与p-stat3呈显著正相关(r=0.986 p0.05)。60CO照射后随着反义寡核苷酸浓度的增加,stat3、p-stat3蛋白表达均明显降低,组间差别具有统计学意义(p0.05)。 结论:STAT3反义寡核苷酸转染喉癌Hep-2细胞,通过下调STAT3蛋白的表达而对细胞周期蛋白进行调控,从而引起细胞周期分布的改变,达到增强放疗敏感性的作用。