新型冠状病毒肺炎(COVID-19)热灭活咽拭子及热灭活后提取核酸样本在4℃保存的稳定性研究

作     者：喻晶 吴夏枫 刘晓翌 纪玲 YU Jing;WU Xia-feng;LIU Xiao-yi;JI Ling

作者机构：北京大学深圳医院检验科广东深圳518029 

出 版 物：《现代检验医学杂志》 (Journal of Modern Laboratory Medicine)

年 卷 期：2020年第35卷第6期

页      面：132-134页

学科分类：1007[医学-药学(可授医学、理学学位)] 100705[医学-微生物与生化药学] 1001[医学-基础医学(可授医学、理学学位)] 1010[医学-医学技术（可授医学、理学学位）] 100103[医学-病原生物学] 10[医学] 

基　　金：深圳市三名工程项目(SZSM201812088) 

主　　题：新型冠状病毒肺炎 热灭活 咽拭子样本 提取核酸 4℃保存 

摘      要：目的研究56℃30 min热灭活后的新型冠状病毒肺炎(COVID-19)咽拭子及提取的核酸在4℃保存的稳定性。方法采用多重荧光定量PCR方法对一例COVID-19患者的咽拭子样本,56℃30 min热灭活后进行COVID-19双靶点(ORF1ab和N基因)核酸检测,把原始咽拭子样本及提取的核酸保存在4℃,分别于24,48,72和96h再次检测咽拭子样本及提取核酸中新冠病毒核酸的含量(Ct值),分析热灭活后咽拭子样本及提取核酸在4℃保存的稳定性。结果COVID-19患者的咽拭子样本,56℃30 min热灭活后核酸检测结果为ORF1ab和N基因双阳性,Ct值分别为31.27和30.64,咽拭子样本4℃保存24,48,72和96h后再次检测ORF1ab和N基因的结果为24h(31.41和30.68),48h(34.13和34.28),72h(34.06和34.11)和96h(36.22和40.02)。提取的核酸4℃保存24,48,72和96h后的检测结果为24h(31.64和30.06),48h(31.62和29.95),72h(31.72和29.75)和96h(31.36和30.09)。56℃30 min热灭活的咽拭子样本在4℃保存24h后,对COVID-19核酸的检测无明显影响(偏倚1%),但4℃保存48~72h,ORF1ab基因核酸降解约7倍,N基因降解约11倍,4℃保存96h,ORF1ab和N基因核酸分别降解30.91倍和666.29倍。但是提取的核酸4℃保存24~96h后,对核酸的检测结果无明显影响(偏倚均小于3%)。结论研究结果表明56℃30 min热灭活后提取的核酸的稳定性比原始咽拭子样本好,热灭活后的咽拭子样本可在4℃保存24h。