猪圆环病毒2型病毒样颗粒的高效组装技术研究

作     者：王彦伟 李鹏昊 梁严予 关洋 逄文强 田克恭 WANG Yan-wei;LI Peng-hao;LIANG Yan-yu;GUAN Yang;PANG Wen-qiang;TIAN Ke-gong

作者机构：国家兽用药品工程技术研究中心洛阳471000 

出 版 物：《中国生物工程杂志》 (China Biotechnology)

年 卷 期：2020年第40卷第11期

页      面：35-42页

核心收录：

学科分类：08[工学] 09[农学] 0901[农学-作物学] 0836[工学-生物工程] 090102[农学-作物遗传育种] 

基　　金：郑洛新自创区创新引领型产业集群专项(201200211200)资助项目 

主　　题：猪圆环病毒2型 病毒样颗粒 切向流技术 高效组装 稳定性 

摘      要：目的:探索猪圆环病毒2型(PCV2)病毒样颗粒(VLPs)的高效组装技术,提高VLPs的稳定性。方法:利用大肠杆菌表达PCV2 Cap蛋白自组装为VLPs,分析不同离子强度下VLPs的稳定性。利用切向流技术添加尿素,降低p H,可使VLPs解组装,利用硫酸铵分级沉淀、阴离子交换层析纯化获得Cap蛋白,去除尿素,提高离子强度和pH,实现VLPs的高效再组装。结果:PCV2 Cap蛋白自组装VLPs在150mmol/L NaCl下稳定性较差,而在500mmol/L NaCl下可提高VLPs的稳定性,但仍较易发生聚集,核酸含量均较高。在150mmol/L NaCl、300mmol/L尿素和p H 5.5的缓冲体系条件下,能够使VLPs解组装。经25%~50%饱和硫酸铵(V/V)分级沉淀粗纯,阴离子交换层析500mmol/L NaCl下洗脱获得精纯Cap蛋白,蛋白质纯度≥95%,并能够有效去除核酸。通过切向流技术去除体系中的尿素,并将NaCl浓度提高至1mol/L、p H提高至8.0,改变蛋白质表面静电荷分布,实现VLPs的高效、均一再组装,组装效率≥99%,回收率为65.85%,并明显提高VLPs的稳定性,能够稳定保存6个月以上。结论:利用硫酸铵分级沉淀、阴离子交换层析纯化获得Cap蛋白,去除尿素,提高离子强度和p H,实现VLPs的高效再组装。