猪轮状病毒、猪札幌病毒和猪星状病毒三重PCR检测方法的建立及应用

作     者：曲雅新 孙连静 张胜斌 王若木 杨春杰 钟莲 周学光 黄克宏 罗期方 陈樱 韦祖樟 黄伟坚 欧阳康 QU Yaxin;SUN Lianjing;ZHANG Shengbin;WANG Ruomu;YANG Chunjie;ZHONG Lian;ZHOU Xueguang;HUANG Kehong;LUO Qifang;CHEN Ying;WEI Zuzhang;HUANG Weijian;OUYAN Kang

作者机构：广西大学动物科学技术学院广西南宁530005 广西农垦永新畜牧集团西江有限公司广西贵港537104 

出 版 物：《畜牧与兽医》 (Animal Husbandry & Veterinary Medicine)

年 卷 期：2020年第52卷第11期

页      面：78-83页

学科分类：090603[农学-临床兽医学] 09[农学] 0906[农学-兽医学] 

基　　金：广西创新驱动发展专项资金项目(桂科AA17204057-1) 广西自然科学基金(2017GXNSFAA198138) 广西高校中青年教师基础能力提升项目(2018KY0048) 广西大学学术骨干科研基金项目(XGZ170239) 贵港市科学研究与技术开发计划项目(贵科攻1829012) 

主　　题：猪轮状病毒 猪札幌病毒 猪星状病毒 三重PCR 

摘      要：为建立一种同时检测猪轮状病毒(PRoV)、猪札幌病毒(PoSaV)和猪星状病毒(PAstV)的三重PCR方法,本研究参考PRoV的VP6基因、PoSaV的RdRp基因以及PAstV的ORF1基因序列分别设计特异性引物,通过特异性、敏感性、重复性试验优化反应条件,建立了快速鉴别PRoV、PoSaV和PAstV的三重PCR方法。试验表明,该方法能特异性扩增PRoV、PoSaV、PAstV的目的片段,对猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)、猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪瘟病毒(CSFV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、伪狂犬病病毒(PRV)、猪圆环病毒2型(PCV2)等常见猪病病毒的检测结果均为阴性,特异性良好;PRoV、PoSaV和PAstV的检测限量分别为1.38×10~2、8.33×10~2和4.40×10~3拷贝数/μL,具有较好的敏感性。利用三重PCR和单重PCR方法同时对80份规模化猪场的临床腹泻样品进行检测,结果表明,3种病毒的样品阳性率均为5.00%,2种方法的检测结果相一致。本研究成功建立了同时PRoV、PoSaV和PAstV的三重PCR检测方法,可用于三种病原感染的临床鉴别诊断。