膀胱逼尿肌中肾上腺素能β_2受体基因克隆与反义真核表达载体的构建

作     者：李刚 孙长成 郑晓华 李凯 宫大鑫 刘屹立 王平 

作者机构：中国医科大学第一临床学院泌尿外科沈阳110001 解放军第二零二医院综合内科 

出 版 物：《中华泌尿外科杂志》 (Chinese Journal of Urology)

年 卷 期：2004年第25卷第6期

页      面：368-370页

核心收录：

学科分类：1002[医学-临床医学] 100210[医学-外科学(含：普外、骨外、泌尿外、胸心外、神外、整形、烧伤、野战外)] 10[医学] 

基　　金：国家自然科学基金项目资助 (3 0 170 3 5 2 ) 

主　　题：膀胱逼尿肌 肾上腺素能β2受体 受体基因 基因克隆 真核表达载体 反义基因 β2-AR 

摘      要：目的 克隆人膀胱逼尿肌中肾上腺素能 β2 受体基因全长 ,构建其反义真核表达载体。 方法 采用RT PCR法从人膀胱逼尿肌中扩增出 β2 AR的全长cDNA序列 ,上游引物 5′端加有BamHⅠ及ClaⅠ酶切位点 ,下游引物加有HindⅢ酶切位点 ,将该片段插入pUC19载体中 ,用ClaI和HindⅢ切下目的基因 ,然后将目的片段反向插入逆转录病毒表达载体pLNCX上。对重组子进行琼脂糖凝胶电泳和测序鉴定。 结果 所克隆的目的基因约为 1.2kb ,并成功连接到逆转录病毒载体pLNCX上 ,测序证明 ,插入的目的片段碱基序列与Genebank报道的完全一致 ,且插入载体方向正确。 结论 成功克隆了人逼尿肌中肾上腺素能 β2 受体基因的全长cDNA序列 ,构建了反义真核表达载体 ,为研究 β2 AR亚型的功能及进一步研究膀胱功能障碍的药物治疗提供了实验依据。