miR-133b靶向YES1抑制心肌缺血再灌注引起的心肌细胞凋亡和活性氧簇的积累

作     者：彭兴 林玲 周祥群 杨大英 曹阳 尹涛源 刘媛媛 PENG Xing;LIN Ling;ZHOU Xiangqun;YANG Daying;CAO Yang;YIN Taoyuan;LIU Yuanyuan

作者机构：三亚中心医院心血管内科海南三亚572000 哈尔滨医科大学第一附属医院心血管内科黑龙江哈尔滨150000 黑龙江省医院心内科黑龙江哈尔滨150000 

出 版 物：《南方医科大学学报》 (Journal of Southern Medical University)

年 卷 期：2020年第40卷第10期

页      面：1390-1398页

核心收录：

学科分类：1002[医学-临床医学] 100201[医学-内科学(含：心血管病、血液病、呼吸系病、消化系病、内分泌与代谢病、肾病、风湿病、传染病)] 10[医学] 

基　　金：黑龙江省卫生计生委科研课题(2016-540) 

主　　题：心肌缺血再灌注 miR-133b YES1 细胞凋亡 活性氧 

摘      要：目的探究miR-133b对心肌缺血再灌注(I/R)诱导心肌细胞凋亡的作用及机制。方法体内实验,将大鼠随机分为4组:假手术组、模型组、转染腺病毒对照组、转染miR-133b腺病毒组,每组9只。在左心室心肌的6个随机点注射转染复合物后,利用左侧冠状动脉前降支打活结方法诱导心肌I/R。通过RT-qPCR检测miR-133b的表达水平,FDP-1 HRV和BRS分析系统测定心功能,酶联免疫吸附法测定血清肌酸激酶同工酶(CK-MB)和心肌肌钙蛋白I(CTnI)水平,HE染色观察心肌损伤,流式细胞术检测细胞凋亡,2,7-二氯荧光素双乙酸酯(DCFH-DA)探针测定ROS含量。体外实验,心肌H9C2细胞经缺氧/复氧(H/R)处理后,转染miR-NC或miR-133b mimic,RT-qPCR检测miR-133b的表达水平,流式细胞术检测细胞凋亡,DCFH-DA探针测定ROS含量;双荧光素酶报告实验验证靶向关系;转染pc-YES1或miR-133b mimic后,Western blot检测YES1的表达水平,流式细胞术检测细胞凋亡,DCFH-DA探针测定ROS含量。结果与I/R组相比,AdmiR-133b组大鼠心肌中miR-133b的表达显著上调,LVEDP、cTnI和CK-MB水平显著降低,LVSP、+dp/dt、-dp/dt、HR和CF水平显著升高,病理损伤显著减轻,心肌细胞凋亡和ROS积累显著减少(P0.01)。与H/R组相比,miR-133b mimic组H9C2细胞的miR-133b表达显著上调,细胞凋亡和ROS积累显著减少(P0.01)。miR-133b与YES1在3’UTR区存在靶向结合位点,共转染YES1 WT和miR-133b mimic可以显著降低荧光素酶活性(P0.01)。miR-133b mimic组与H/R组相比H9C2细胞中YES1蛋白的表达显著下调(P0.01)。共转染pc-YES1逆转miR-133b过表达对心肌细胞凋亡和ROS积累的作用。结论无论是在体内还是体外,miR-133b靶向YES1抑制I/R引起的心肌细胞凋亡和ROS的积累,从而减轻心肌I/R损伤。