p38MAPK基因沉默对PM2.5染毒肝细胞后癌基因和凋亡基因表达的影响

作     者：王冰玉 秦双建 李闰冰 李柏茹 蔡颖 郑凯 徐新云 谢红卫 Wang Bingyu;Qin Shuangjian;Li Runbing;Li Boru;Cai Ying;Zheng Kai;Xu Xinyun;Xie Hongwei

作者机构：深圳市疾病预防控制中心环境与健康所518055 南华大学公共卫生学院衡阳421001 中南大学湘雅公共卫生学院长沙410078 

出 版 物：《中华劳动卫生职业病杂志》 (Chinese Journal of Industrial Hygiene and Occupational Diseases)

年 卷 期：2020年第38卷第10期

页      面：721-725页

学科分类：100405[医学-卫生毒理学] 1004[医学-公共卫生与预防医学(可授医学、理学学位)] 10[医学] 

基　　金：深圳市科技研发基础研究项目(JCYJ20170413101713324) 

主　　题：肝细胞 基因沉默 细颗粒物 雾霾 凋亡基因 癌基因 

摘      要：目的研究p38丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)基因沉默对大气细颗粒物(PM2.5)染毒肝细胞(L02细胞)相关基因表达的影响。方法于2019年6至9月,根据GenBank提供的p38MAPK基因序列,设计合成3条干扰序列,退火后连接到PLVX-shRNA2-puro中,将重组慢病毒载体转染L02细胞。用实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)和蛋白免疫印迹(Western blotting)法对p38MAPK基因沉默效果进行鉴定。用浓度为50μg/ml的PM2.5水溶物和10μmol/L阳性对照Cr^6+分别染毒L02细胞、p38MAPK基因沉默细胞24 h,同时设立空白对照组。用荧光定量PCR检测癌基因(c-fos、c-myc、k-ras)、抑癌基因(p53)和凋亡基因(Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9)的相对表达水平。结果p38MAPK基因沉默细胞中p38MAPK基因和蛋白表达水平较正常L02细胞明显下降(P0.05),p38MAPK基因沉默细胞株构建成功。与空白对照组比较,PM2.5染毒L02细胞组癌基因c-fos、c-myc、k-ras和凋亡基因Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9表达水平升高,抑癌基因p53表达水平下降,差异均有统计学意义(P0.05);与PM2.5染毒L02细胞组比较,PM2.5染毒p38MAPK基因沉默细胞组癌基因c-fos、c-myc、k-ras和凋亡基因Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9表达水平下降,抑癌基因p53表达水平升高,差异均有统计学意义(P0.05)。结论PM2.5对L02细胞癌基因、抑癌基因和凋亡基因表达有明显影响,而p38MAPK基因沉默可抑制PM2.5对L02细胞的影响。