实时PCR定量分析体内基因转染效率的可行性

作     者：高春记 

作者机构：解放军总医院血液科 

出 版 物：《中国实验血液学杂志》 (Journal of Experimental Hematology)

年 卷 期：2003年第11卷第2期

页      面：132-136页

学科分类：0831[工学-生物医学工程（可授工学、理学、医学学位）] 0710[理学-生物学] 07[理学] 08[工学] 09[农学] 071007[理学-遗传学] 0901[农学-作物学] 0836[工学-生物工程] 090102[农学-作物遗传育种] 

主　　题：实时PCR定量分析 基因转染效率 克隆 逆转录病毒载体 生物医学 

摘      要：为了探索实时PCR技术评价基因转染效率的可行性 ,利用克隆PCR检测逆转录病毒载体介导的neo基因导入原代成肌细胞的转染效率 ,同时行实时PCR检测 ,对二者结果进行对比分析 ;利用线性扩增介导的PCR(LAM PCR)技术和逆转录病毒 5′LTR插入细胞基因组位点的分析 ,确定单细胞内基因转染的拷贝数。结果显示 :①在低转染率的情况下 (36 % )二者的结果相近 ,但是在高转染率情况下二者的结果差别明显 ;②逆转录病毒载体介导的转染 ,在原代成肌细胞中为单拷贝基因导入基因组内。结论 :实时PCR可以比较精确地估计体内病毒载体介导的基因转染效率 ;而在体外由于多为高转染率 。