高温纤维素降解菌的筛选及内切酶基因的克隆表达

作     者：田伟 王磊 李刚 汪贞 李妍 张纪兵 TIAN Wei;WANG Lei;LI Gang;WANG Zhen;LI Yan;ZHANG Ji-bing

作者机构：环境保护部南京环境科学研究所南京210042 

出 版 物：《农业环境科学学报》 (Journal of Agro-Environment Science)

年 卷 期：2014年第33卷第4期

页      面：788-793页

核心收录：

学科分类：07[理学] 09[农学] 0903[农学-农业资源与环境] 0713[理学-生态学] 

基　　金：环保公益性行业科研专项(201209036) 环保公益性行业科研专项(201309036) 中央级公益性科研院所基本科研业务专项"猪粪有机肥在有机蔬菜生产过程中的安全评价研究" 

主　　题：纤维素降解菌 内切酶基因 克隆 表达 结构域 

摘      要：以滤纸条作为唯一碳源从以牛粪和砻糠为原料的堆肥样品中分离到了8株具有纤维素降解特性的微生物,其中菌株T1和T2在刚果红培养基上培养48 h后的水解圈明显大于其他菌株。对菌株T1和T2进行了生理生化和16S rRNA序列分析,克隆了菌株T2的内切酶基因并对该基因进行了结构域分析,同时构建了表达载体p28-egB并将其转化至*** BL21(DE3)感受态细胞中进行表达。研究结果表明:(1)菌株T1和T2可分别鉴定为Bacillus cereus和Bacillus subtilis;(2)菌株T2的内切酶基因片段大小为1500 bp,编码499个氨基酸,结构域分析显示该酶由两个不连续的结构域组成,其一为N端催化结构域,由糖基水解酶家族5组成,其二为C端底物结合结构域,由碳水化合物绑定结构域家族3组成;(3)在*** BL21中成功表达了菌株T2的内切酶基因,SDS-PAGE电泳图谱显示该蛋白大小约为50 KD,浓度约为93.14 mg·L-1。