特异性shRNA抑制人近端肾小管上皮细胞Toll样受体4的表达

作     者：聂祥智 朱忠华 邓安国 杨晓 NIE Xiangzhi;ZHU Zhonghua;DENG Anguo;YANG Xiao

作者机构：华中科技大学同济医学院附属协和医院肾内科湖北武汉430022 

出 版 物：《武汉大学学报（医学版）》 (Medical Journal of Wuhan University)

年 卷 期：2007年第28卷第3期

页      面：287-291,F0002页

学科分类：1002[医学-临床医学] 100210[医学-外科学(含：普外、骨外、泌尿外、胸心外、神外、整形、烧伤、野战外)] 10[医学] 

基　　金：湖北省科技攻关项目(编号:2005AA301C24) 

主　　题：短发卡RNA RNA干扰 人近端肾小管上皮细胞 Toll样受体4 

摘      要：目的:研究RNA干扰法对人近端肾小管上皮细胞(HKC)中Toll样受体4(TLR4)表达的抑制作用。方法:将针对TLR4分子设计的采用体外转录生物合成的特异性短发卡RNA(shRNA)双链分子用脂质体转染的方法导入体外培养的HKC;应用免疫荧光染色在共聚焦显微镜下观察TLR4的分布及表达强弱;半定量RT-PCR和免疫蛋白印迹检测TLR4及内参照-βactin在mRNA水平和蛋白水平的表达量。结果:干扰组TLR4的荧光强度显著低于对照组,其mRNA和蛋白的表达量分别下降了67%和62%。同时观察到TLR4主要分布于HKC细胞的胞膜及胞质区。结论:采用生物体外转录的方法成功合成针对TLR4的shRNA双链分子,并有效地转入HKC细胞中使TLR4的表达下调。