表达猪流行性腹泻病毒COE基因的重组乳酸菌的构建与鉴定

作     者：董丽娜 高凤山 许崇波 胡桂学 姜海龙 DONG Li-na;GAO Feng-shan;XU Chong-bo;HU Gui-xue;JIANG Hai-long

作者机构：吉林农业大学动物科学技术学院长春130118 大连大学生物工程学院大连116622 

出 版 物：《畜牧兽医学报》 (ACTA VETERINARIA ET ZOOTECHNICA SINICA)

年 卷 期：2008年第39卷第12期

页      面：1743-1747页

核心收录：

学科分类：090601[农学-基础兽医学] 09[农学] 0906[农学-兽医学] 

基　　金：国家自然科学基金资助项目(30571382) 

主　　题：PEDV COE基因 克隆 乳酸乳球菌 表达 

摘      要：用疑似患猪流行性腹泻病(PED)的病猪肠病料,根据猪流行性腹泻病毒(PEDV)S糖蛋白基因设计引物进行RT-PCR扩增,获得531 bp的PEDV部分保护性抗原基因,将其克隆入pMD18-T载体后测序,核苷酸序列与PEDV CV777株相应序列的同源性为99.4%。根据测序结果和表达载体特点,设计一对引物,扩增PEDV部分保护性抗原基因(COE基因)501 bp片段。将COE基因与乳酸乳球菌表面表达载体pNZ8149进行连接,电击转化入食品级乳酸乳球菌NZ3900细胞。重组菌以1 ng/mL乳链菌肽(Nisin)诱导,通过SDS-PAGE和Western blot分析,PEDV部分S蛋白成功表达,并具有反应原性。间接免疫荧光试验表明,重组菌表达蛋白定位于菌体细胞表面。