家蚕微孢子虫海藻糖酶3的表达、定位及功能

作     者：张轶岭 李俊昊 宁嘉兴 Bismark KYEI 沈中元 ZHANG Yi-Ling;LI Jun-Hao;NING Jia-Xing;Bismark KYEI;SHEN Zhong-Yuan

作者机构：江苏科技大学生物技术学院江苏镇江212018 

出 版 物：《昆虫学报》 (Acta Entomologica Sinica)

年 卷 期：2020年第63卷第6期

页      面：727-734页

核心收录：

学科分类：0710[理学-生物学] 07[理学] 09[农学] 

基　　金：江苏省自然科学基金项目(BK20160364) 现代农业产业技术体系建设专项(CARS-18) 

主　　题：家蚕微孢子虫 海藻糖酶 原核表达 RNA干扰 qRT-PCR 

摘      要：【目的】本研究旨在初步明确家蚕微孢子虫Nosema bombycis海藻糖酶3(NbTre3)的功能,为家蚕Bombyx mori微粒子病的防治提供理论依据和线索。【方法】通过PCR扩增NbTre 3,构建原核表达载体pET28a-NbTre 3;经IPTG诱导在大肠杆菌Escherichia coli中表达重组蛋白NbTre3,Western blot检测目的蛋白;Ni柱亲和层析法对重组蛋白NbTre3进行纯化,用获得的NbTre3免疫新西兰兔制备多克隆抗体;利用间接免疫荧光技术对成熟家蚕微孢子虫中的NbTre3进行定位;qRT-PCR检测家蚕微孢子虫感染家蚕5龄起蚕后不同时间中肠中NbTre 3的转录水平;通过分别注射siRNA-1,siRNA-2和siRNA-3进行RNAi,qRT-PCR检测RNAi后不同时间感染家蚕微孢子虫的家蚕5龄起蚕中肠中NbTre 3和16S rRNA的转录水平。【结果】成功纯化并获得重组目的蛋白NbTre3,大小约为34 kD。免疫新西兰兔后,收集血清,纯化获得NbTre3多克隆抗体,经Western blot鉴定正确。间接免疫荧光结果显示NbTre3主要分布在成熟家蚕微孢子虫孢原质中。qRT-PCR结果表明,家蚕微孢子虫感染后6 h时家蚕5龄起蚕中肠中NbTre3的表达量最高;siRNA抑制NbTre 3的表达后,家蚕微孢子虫16S rRNA的转录水平没有明显的变化。【结论】结果提示NbTre3可能在家蚕微孢子虫感染初期的发芽过程中发挥重要的作用。