两种水源性诺如病毒富集方法的比较

作     者：冯微宏 肖勇 钱燕华 许秋瑾 FENG Weihong;XIAO Yong;QIAN Yanhua;XU Qiujin

作者机构：南京医科大学公共卫生学院全球健康中心江苏南京211166 无锡市疾病预防控制中心江苏无锡214023 中国环境科学研究院环境基准与风险评估国家重点实验室北京100012 

出 版 物：《环境科学研究》 (Research of Environmental Sciences)

年 卷 期：2020年第33卷第6期

页      面：1549-1554页

核心收录：

学科分类：0830[工学-环境科学与工程（可授工学、理学、农学学位）] 1004[医学-公共卫生与预防医学(可授医学、理学学位)] 08[工学] 0815[工学-水利工程] 0706[理学-大气科学] 100402[医学-劳动卫生与环境卫生学] 10[医学] 

基　　金：国家自然科学基金项目(No.41673122) 

主　　题：诺如病毒 阴离子膜 阳离子膜 病毒富集 

摘      要：评估阳离子膜吸附-洗脱法和阴离子膜吸附-洗脱法在富集水源性诺如病毒(NV)过程中的病毒回收效果、消耗时间及使用成本,可以获得更适用于水源性诺如病毒实际监测工作的较优富集方法.以无锡市疾病预防控制中心保存的诺如病毒阳性标准质粒为模板,采用荧光定量RT-PCR(反转录酶-聚合酶链反应)方法绘制病毒定量标准曲线,并应用于病毒的绝对定量.将含诺如病毒的粪便悬液先稀释成3个不同浓度,并加入灭菌水中,分别经过阴离子膜(硝酸纤维素滤膜)或阳离子膜(Nanoceram膜)吸附洗脱,最终相同体积洗脱液提取核酸后用荧光定量RT-PCR方法进行绝对定量,并进一步计算最终病毒回收率.结果表明:①样本病毒浓度为8×10^1~8×10^10 copies/μL时,病毒拷贝数的lg对数值与C t(荧光定量PCR中达到设定阈值所经过的循环数)呈线性关系.②随着样本病毒浓度的增加,阴离子膜法和阳离子膜法的病毒回收率都相应增加.③当检测样本中病毒浓度分别为8×10^1、4×10^2 copies/μL时,阴离子膜法回收率分别为22.2%±4.1%和36.8%±6.2%,阳离子膜法回收率分别为17.4%±1.5%和28.8%±6.1%,说明阴离子膜吸附-洗脱法对病毒的富集回收率显著高于阳离子膜吸附-洗脱法(P0.05).研究显示,综合富集效果、耗费时间和成本等因素,阴离子膜吸附-洗脱法比阳离子膜吸附-洗脱法更适用于日常水源性诺如病毒的富集工作.