反义寡核苷酸vMO调控Bcl-x剪接对人乳腺癌细胞侵袭转移的影响

作     者：李清祥 廖志华 张静 刘勇 白羽 蒋沁炆 朱春龙 邬艳 王小中 刘静 LI Qing-xiang;LIAO Zhi-hua;ZHANG Jing;LIU Yong;BAI Yu;JIANG Qin-wen;ZHUChun-long;WU Yan;WANG Xiao-zhong;LIU Jing

作者机构：南昌市第三医院检验科江西南昌330009 江西省妇幼保健院检验科 南昌大学第二附属医院检验科 江西省检验医学重点实验室 南昌市东湖区疾病预防控制中心 

出 版 物：《中国病原生物学杂志》 (Journal of Pathogen Biology)

年 卷 期：2020年第15卷第5期

页      面：527-532页

核心收录：

学科分类：1002[医学-临床医学] 100214[医学-肿瘤学] 10[医学] 

基　　金：国家自然科学基金项目(No.81560033,No.81860034) 江西省科技厅科技计划项目(No.20171BAB205067) 江西省教育厅课题(No.GJJ170158) 

主　　题：乳腺癌细胞 Bcl-x 反义寡核苷酸 侵袭 转移 

摘      要：目的探讨靶向纠正Bcl-x基因异常剪接对人乳腺癌细胞侵袭转移等生物学行为的影响。方法人乳腺癌MDA-MB-231细胞和正常NIH3T3细胞均设转染组和空白对照组。实验组采用靶向Bcl-x基因的特异性Vivo-Morpholino Antisense Oligomer(vMO)进行转染,空白对照组常规培养。采用qRT-PCR和Western Blot分别检测各组Bcl-x剪接体Bcl-xL和Bcl-xS mRNA和蛋白表达水平,通过流式细胞仪(FCM)、平板克隆形成试验、Transwell侵袭试验及划痕试验检测vMO对MDA-MB-231和NIH3T3细胞增殖、凋亡、侵袭及转移的影响。结果VMO能稳定高效转染细胞,荧光阳性率达99.17%,并能持续稳定存在7天以上;VMO能在胞内有效调节Bcl-x的剪接模式,MDA-MB-231细胞中Bcl-xL mRNA和蛋白较对照组显著降低,而Bcl-xS mRNA和蛋白较对照组显著升高(P0.05);平板克隆形成试验和FCM结果显示,vMO转染前后,NIH3T3细胞克隆形成率分别为43%和35%,凋亡率分别为0.27%和0.53%,差异均无统计学意义;vMO转染MDA-MB-231细胞前后,穿膜细胞数分别为(67±1)和(47±1)个,发生迁移的细胞数分别为(106±2)和(78±1)个,差异具有统计学意义(P0.05);划痕试验显示,转染组MDA-MB-231细胞划痕愈合能力较对照组减弱(P0.05),平均迁移距离分别为(218±21)mm和(389±12)mm。结论vMO靶向结合Bcl-x pre-mRNA促使Bcl-xL向Bcl-xS转化,在抑制乳腺癌细胞侵袭及转移方面具有重要作用。