基于CRISPR/Cas9技术构建人CLCN7基因编辑载体

作     者：孙国平 马驰宇 朱鹏 薛雯 龚蔚蔚 欧明林 SUN Guoping;MA Chiyu;ZHU Peng;XUE Wen;GONG Weiwei;OU Minglin

作者机构：深圳市坪山区人民医院中心实验室广东深圳518118 广西师范大学生命科学学院广西桂林541004 中国人民解放军第九二四医院中心实验室广西代谢性疾病研究重点实验室广西桂林541002 深圳市人民医院临床医学研究中心广东深圳518020 

出 版 物：《实验与检验医学》 (Experimental and Laboratory Medicine)

年 卷 期：2020年第38卷第3期

页      面：470-472,475页

学科分类：1002[医学-临床医学] 1001[医学-基础医学(可授医学、理学学位)] 100210[医学-外科学(含：普外、骨外、泌尿外、胸心外、神外、整形、烧伤、野战外)] 10[医学] 

基　　金：坪山区卫生系统科研项目(201801) 深圳市卫生计生系统科研项目(201601065) 深圳市科技计划项目(JCYJ20180305163846927) 广西自然科学基金项目(2015GXNSFBA139176) 

主　　题：石骨症 CRISPR/Cas9技术 CLCN-7基因 基因编辑载体 

摘      要：目的为修复石骨症致病基因(CLCN7)进行前期探索,采用CRISPR/Cas9技术构建CLCN7基因编辑表达载体。方法根据sgRNA设计原则,在CLCN7外显子区设计一对sgRNA,合成四条单链DNA寡核苷酸,退火后连接于CRISPR/Cas9质粒的BspQ I酶切位点处,然后转染感受态大肠杆菌DH5α,并通过氨苄青霉素抗性筛选阳性克隆,扩大培养。结果最后经过PCR和Sanger测序鉴定获得了两个基因编辑表达载体CLCN7-sg1RNA-CRISPR-Cas9和CLCN7-sg2RNACRISPR-Cas9。结论基因编辑载体的成功构建为CLCN7突变修复提供了工作基础。