乙型肝炎病毒X蛋白对核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3炎性小体的激活及机制研究

作     者：汪玉兰 陈伟庆 Wang Yulan;Chen Weiqing

作者机构：重庆医科大学附属第二医院消化内科400010 

出 版 物：《中华消化外科杂志》 (Chinese Journal of Digestive Surgery)

年 卷 期：2016年第15卷第6期

页      面：615-621页

核心收录：

学科分类：1004[医学-公共卫生与预防医学(可授医学、理学学位)] 1002[医学-临床医学] 100214[医学-肿瘤学] 100401[医学-流行病与卫生统计学] 10[医学] 

基　　金：基金项目:重庆市自然科学基金(2010BA5011) 

主　　题：肝肿瘤 乙型肝炎病毒X蛋白 核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3炎性小体 活性氧 

摘      要：目的：探讨乙型肝炎病毒X蛋白（HBx蛋白）对核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3 （NLRP3）炎性小体活性的影响及其促进HBV相关性肝细胞肝癌（HCC）的作用机制。 方法：采用实验研究方法。将HepG2细胞株分为5组：空白对照组（未转染质粒），空载质粒组［转染pE绿色荧光蛋白（GFP）N1空载质粒］，全长HBx蛋白组（转染pEGFP-N1-X质粒），HBx 1-127组（转染pEGFP-N1-X1-127质粒），HBx1-101组（转染pEGFP-N1-X1-101质粒）。（1）采用Western blot检测HBx蛋白和NLRP3炎性小体蛋白［采用脂多糖＋ATP干预空白对照组HepG2细胞］的表达。（2）分别采用格列本脲、吡咯烷二硫代甲酸铵盐（APDC）干预全长HBx蛋白HepG2细胞，采用ELISA检测IL-1β和IL-18的表达。（3）采用流式细胞仪检测活性氧的表达。正态分布的计量资料以±s表示，多组间比较采用单因素方差分析，两两比较采用t检验。 结果：（1）Western blot检测结果显示：①空白对照组、空载质粒组、全长HBx蛋白组、HBx1-127组、HBx1-101组HepG2细胞中HBx重组质粒融合蛋白的相对表达量分别为0.07±0.03、0.92±0.13、0.84±0.11、0.30±0.06、0.29±0.05，其中HBx1-127组和HBx1-101组HepG2细胞中分别为HBx1-127蛋白和HBx1-101蛋白的表达。5组比较，差异有统计学意义（F=61.790，P〈0.05）。其中全长HBx蛋白组分别与空白对照组、HBx1-127组、HBx1-101组比较，差异均有统计学意义（t=12.070，7.465，7.801，P〈0.05）；全长HBx蛋白组与空载质粒组比较，差异无统计学意义（t=0.867，P〉0.05）；HBx1-127组和HBx1-101组比较，差异无统计学意义（t=0.146，P〉0.05）。②空白对照组、全长HBx蛋白组、HBx1-127组、HBx1-101组、脂多糖＋ATP组HepG2细胞中NLRP3炎性小体蛋白的相对表达量分别为0.29±0.06、0.83±0.14、0.27±0.06、0.27±0.05、0.90±0.16，5组比较，差异有统计学意义（F=29.550，P〈0.05）。其中脂多糖＋ATP组分别与空白对照组、HBx1-127组、HBx1-101组比较，差异均有统计学意义（t=6.310，6.565，6.741，P〈0.05）；全长HBx蛋白组分别与HBx1-127组、HBx1-101组比较，差异均有统计学意义（t=6.381，6.584，P〈0.05）；脂多糖＋ATP组与全长HBx蛋白组比较，差异无统计学意义（t=0.580，P〉0.05）。（2）ELISA检测结果显示：①空白对照组、全长HBx蛋白组、HBx1-127组、HBx1-101组、脂多糖＋ATP组HepG2细胞中IL-1β的表达量分别为（87±9）pg/mL、 （587±56）pg/mL、（125±12）pg/mL、（113±13）pg/mL、（677±74）pg/mL，IL-18的表达量分别为（43±8）pg/mL、（252±38）pg/mL、（70±13）pg/mL、（63±10）pg/mL、（263±48）pg/mL。HepG2细胞中IL-1β的表达量 5组比较，差异有统计学意义（F=139.010，P〈0.05）；其中脂多糖＋ATP组分别与空白对照组、HBx1-127组、HBx1-101组比较，差异均有统计学意义（t=13.691，12.752，13.001，P〈0.05）；全长HBx蛋白组分别与HBx1-127组、HBx1-101组比较，差异均有统计学意义（t=14.051，14.283，P〈0.05）；脂多糖＋ATP组与全长HBx蛋白组比较，差异无统计学意义 （t=1.691，P〉0.05）。HepG2细胞中IL-18的表达量5组比较，差异有统计学意义（F=44.010，P〈0.05）；其中脂多糖＋ATP组分别与空白对照组、HBx1-127组、HBx1-101组比较，差异均有统计学意义（t=7.848，6.722，7.065，P〈0.05）；全长HBx蛋白组分别与HBx1-127组、HBx1-101组比较，差异均有统计学意义 （t=7.882，8.331，P〈0.05）；脂多糖＋ATP组与全长HBx蛋白组比较，差异无统计学意义（t=0.326，P〉0.05）。②加格列本脲前、后全长HBx蛋白HepG2细胞中IL-1β的表达量分别为（587±91）pg/mL、（115±17）pg/mL，两者比较，差异有统计学意义（t=8.800，P〈0.05）。加格列本脲前、后全长HBx蛋白HepG