抗HBsAg表位单克隆抗体的制备及HBV血清型夹心ELISA的建立

作     者：张晓磊 聂玉哲 蓝兴国 李玉花 

作者机构：东北林业大学生命科学学院黑龙江哈尔滨150040 大庆麦伯康生物技术有限公司黑龙江大庆163316 东北林业大学大庆生物技术研究院黑龙江大庆163316 

出 版 物：《细胞与分子免疫学杂志》 (Chinese Journal of Cellular and Molecular Immunology)

年 卷 期：2014年第30卷第2期

页      面：171-175页

核心收录：

学科分类：1001[医学-基础医学(可授医学、理学学位)] 100102[医学-免疫学] 10[医学] 

基　　金：黑龙江省发展高新技术产业专项资金(FW11C201) 大庆高新区科技专项资金(DQGX10ZS005) 

主　　题：乙型肝炎表面抗原 单克隆抗体 表位 夹心ELISA 

摘      要：目的制备抗乙型肝炎病毒(HBV)表面抗原(HBsAg)表位单克隆抗体(mAb),建立HBV血清型夹心ELISA检测方法。方法将HBsAg亚型蛋白分别免疫小鼠,通过细胞融合、高通量筛选ELISA(HTS-ELISA)筛选后得到杂交瘤细胞株并在无血清培养基中扩大培养。采用蛋白A对抗体进行纯化并测定抗体亲和力、亚型、特异性,最后建立双抗体夹心ELISA。结果HBsAg的亚型蛋白ad、adr及ayw分别免疫小鼠后,其血清效价达到1∶105。细胞融合及HTS-ELISA筛选后获得4株杂交瘤细胞株。经过纯化后得到的mAb分别命名为#2-4,#18-3,#7-7,#56-5,亲和力都在1×109L/mol以上。间接ELISA结果显示,#2-4,#18-3,#7-7,#56-5分别特异性地与HBsAg的d,y,r,w表位结合。用抗HBsAga表位的mAb#3-11分别与这4株抗体组合,进行夹心ELISA检测。结果显示,不同的ELISA组合能特异性地检测HBsAg的d,y,r,w表位。结论成功制备了亲和力高、特异性好的抗HBsAg 4个表位的mAb,建立了检测HBV血清型的双抗体夹心ELISA。