人心肌肌钙蛋白I的原核表达与纯化

作     者：孙牧男 刘磊 许淑芬 方艳秋 谭岩 

作者机构：吉林大学第一医院中心实验室吉林长春130021 

出 版 物：《中国实验诊断学》 (Chinese Journal of Laboratory Diagnosis)

年 卷 期：2010年第14卷第3期

页      面：358-361页

学科分类：1002[医学-临床医学] 100201[医学-内科学(含：心血管病、血液病、呼吸系病、消化系病、内分泌与代谢病、肾病、风湿病、传染病)] 10[医学] 

基　　金：吉林省科技厅重点项目(合同编号:20060417-1) 吉林省科技厅重点项目(合同编号:20080435-1) 长春市科技局计划项目(合同编号:长科技合2008254号 08YJ37) 

主　　题：人心肌肌钙蛋白I 原核表达 镍凝胶亲和层析 

摘      要：目的构建人心肌肌钙蛋白I(human cardiac troponin I,hcTnI)原核表达载体并表达、分离纯化重组蛋白。方法RT-PCR从人心肌组织中克隆出hcTnI的cDNA序列构建到原核表达载体pQE30,获得重组表达质粒pQE30-hcTnI,并在大肠杆菌M15中诱导表达。镍凝胶亲和层析纯化目的蛋白,Western Blot杂交鉴定重组蛋白。结果经测序证实,获得的目的基因与(GeneBank M64247)公布的hcTnI基因序列一致。pQE30-hcTnI在大肠杆菌M15中经IPTG诱导后表达出相对分子量约为29 kD的目的蛋白,镍柱纯化后经抗hcTnI单克隆抗体进行Western印记,在相对分子量约29kD处可见特异性着色带。结论体外成功诱导了重组hcTnI蛋白表达,通过镍凝胶亲和层析法获得纯度较高的hcTnI蛋白,为进一步获得hcTnI的抗体及建立相应的临床快速检测方法奠定了实验基础。