实时聚合酶链反应熔解曲线分析检测APC基因突变

作     者：郑薇薇 刘忠臣 李庆阁 

作者机构：厦门大学生命科学学院生物医学科学系 厦门市中山医院 

出 版 物：《中华病理学杂志》 (Chinese Journal of Pathology)

年 卷 期：2005年第34卷第10期

页      面：669-671页

核心收录：

学科分类：1002[医学-临床医学] 100214[医学-肿瘤学] 10[医学] 

基　　金：国家自然科学基金资助项目(30170834) 福建省自然科学基金重点项目(C0220001) 

主　　题：聚合酶链反应 基因 APC 结肠直肠肿瘤 

摘      要：目的建立一种准确、方便、价廉、适合临床的APC基因突变检测方法。方法采用SYBRGreenⅠ为实时聚合酶链反应(PCR)指示剂,首先从基因组DNA中扩增包含突变位点的靶基因(270bp),并通过熔解曲线分析确定产物;再以上述片段为模板扩增特定长度的小片段(40/35bp),以0.5℃/step的速率,获得从65℃到99℃的熔解曲线以检测APC_1309位5bp缺失突变。结果临床标本检测结果表明:18例结直肠肿瘤患者石蜡组织标本中检出APC_1309位5bp缺失突变7例,20例正常人外周血标本检测结果均为阴性。结论实时PCR熔解曲线法设计简单,操作简便,结果可靠,可望应用于临床APC基因突变检测,并可推荐用于其他基因突变的检测。