粉尘螨瘦素受体叠加转录蛋白样1基因克隆及序列分析

作     者：杨华莹 朱晗婷 崔玉宝 YANG Hua-Ying;ZHU Han-Ting;CUI Yu-Bao

作者机构：南京医科大学附属无锡人民医院无锡214023 

出 版 物：《中国血吸虫病防治杂志》 (Chinese Journal of Schistosomiasis Control)

年 卷 期：2020年第32卷第3期

页      面：248-254页

核心收录：

学科分类：1004[医学-公共卫生与预防医学(可授医学、理学学位)] 1002[医学-临床医学] 1001[医学-基础医学(可授医学、理学学位)] 100103[医学-病原生物学] 10[医学] 

主　　题：瘦素受体叠加转录蛋白样1 尘螨 粉尘螨 基因克隆 

摘      要：目的获得粉尘螨瘦素受体叠加转录蛋白样1(Leptin receptor overlapping transcript-like 1,LepROTL1)的编码基因及其分子特征,并构建表达质粒。方法根据转录组测序结果,获得粉尘螨LepROTL1编码基因序列片段。据此设计引物,应用实时PCR技术从粉尘螨总RNA中扩增全长基因片段,构建原核表达质粒pET28a(+)-LepROTL1后测序。将该质粒转化至大肠埃希菌BL21(DE3)T1R,异丙基-b-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,采用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和免疫印迹(Western blotting)鉴定表达产物。采用生物信息学软件分析该序列及其编码的蛋白质分子特征。结果 PCR扩增产物经琼脂糖凝胶电泳显示1个清晰条带;构建的质粒pET28a(+)-LepROTL1经测序显示,该编码基因从起始密码子ATG至终止密码子TAA共417 bp,该质粒转化大肠埃希菌后经IPTG诱导,SDS-PAGE见特异性条带,提示有表达。生物信息学分析显示,该基因编码的蛋白质由134个氨基酸组成,相对分子质量为14 378.13 Da,其亲水性指数为1.149,有一定疏水性;二级结构包括α-螺旋(19 aa,14.18%)、延伸主链(48 aa,35.82%)和无规卷曲(67 aa,50.00%)。将该基因推导出的氨基酸序列进行BLAST获得同源基因,构建的系统进化树中粉尘螨与屋尘螨聚成一簇。结论本研究获得了粉尘螨LepROTL1编码基因全长及其表达质粒,通过生物信息学分析获得其分子特征,为进一步研究该基因奠定了基础。